本文關(guān)鍵詞：鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建及篩選

  更多相關(guān)文章： 噬菌體展示 E型肉毒毒素 抗體庫 單鏈抗體

【摘要】：目的:構(gòu)建鼠源E型肉毒毒素(BoNT/E)免疫噬菌體單鏈抗體庫,篩選BoNT/E特異性抗體。方法:從E型肉毒類毒素免疫小鼠的脾細胞中提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA,分別擴增出小鼠重鏈可變區(qū)基因和輕鏈可變區(qū)基因;通過重疊延伸PCR將重鏈可變區(qū)基因和輕鏈可變區(qū)基因組裝成scFv基因,重組于噬粒pS100中,電轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG_1,合并所有克隆成初級庫;隨機挑取克隆進行核苷酸序列測定,對初級庫序列多樣性進行分析;在輔助噬菌體M_(13)K_(07)的拯救下,構(gòu)建成scFv噬菌體抗體庫;用純化的BoNT/E對鼠源BoNT/E免疫噬菌體單鏈抗體庫進行3輪富集篩選,制備單克隆的噬菌體抗體顆粒進行酶聯(lián)免疫吸附試驗,陽性克隆進行核苷酸序列測定。結(jié)果:鼠源BoNT/E免疫噬菌體單鏈抗體庫的庫容為7.09×10~7,隨機挑取的20個克隆序列各不相同,序列正確率為85%,基本覆蓋了IgHV、IgKV、IgLV的優(yōu)勢家族;純化的BoNT/E作為抗原通過3輪篩選,噬菌體抗體富集了66倍,第3輪篩選后隨機挑取90個克隆制備噬菌體抗體顆粒,酶聯(lián)免疫吸附試驗分析有88個呈現(xiàn)陽性反應(yīng),序列比對得到了24個不同序列的BoNT/E特異性抗體。結(jié)論:構(gòu)建了庫容量達7.09×10~7的鼠源BoNT/E免疫噬菌體單鏈抗體庫,篩選得到了24個不同序列的BoNT/E特異性抗體。
【作者單位】： 蘭州生物制品研究所有限責任公司;
【關(guān)鍵詞】： 噬菌體展示 E型肉毒毒素 抗體庫 單鏈抗體
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 肉毒毒素是由肉毒梭菌產(chǎn)生的一種細菌外毒 素。根據(jù)抗原性的不同,肉毒毒素分為A~G共7個血清型,其中A、B、E和極少數(shù)F型主要引發(fā)以人遲緩性神經(jīng)麻痹為特征的肉毒中毒“1。肉毒毒素是目前所知生物毒素中毒性最強的物質(zhì)。雖然肉毒中毒 的發(fā)病率低,但死亡率高,特別是肉毒毒素可

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 邵建軍,苗向陽,朱瑞良,丁淑燕,陳永福;天然鼠源噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2005年01期

2 羅翠紅;王弘;劉細霞;沈玉棟;孫遠明;黃佳佳;張宏斌;;抗呋喃它酮代謝物的衍生物噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建[J];食品科學(xué);2010年19期

3 房師松,趙玉梅,何建凡,劉濤,劉建軍,趙樹進;A型流感病毒核蛋白噬菌體單鏈抗體體外表達鑒定[J];衛(wèi)生研究;2005年03期

4 周艷紅;祭芳;丁襯襯;史建榮;;抗脫氧雪腐鐮刀菌烯醇噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建與鑒定[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報;2010年05期

5 房師松,趙玉梅,何建凡,劉濤,劉建軍,趙樹進;A型流感病毒核蛋白噬菌體單鏈抗體的原核表達[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2005年01期

6 朱萍霞,黃偉;噬菌體單鏈抗體文庫的構(gòu)建及篩選[J];生命科學(xué)研究;2005年S1期

7 孫春燕;;從噬菌體單鏈抗體庫中篩選MMP7單鏈抗體[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2008年03期

8 裴世春;孫大慶;郭德軍;宋薇;蔣琛;;鼠源抗AFB1噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建與鑒定[J];齊齊哈爾大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2010年06期

9 張宏斌,江悅?cè)A,王捷,楊太成,王元利,譚尚恒,于茂生;抗人膀胱癌噬菌體單鏈抗體的初步制備[J];免疫學(xué)雜志;1997年02期

10 喬媛媛;張達矜;趙曉航;;噬菌體單鏈抗體堿性磷酸酶細胞ELISA檢測方法的建立[J];中國生物制品學(xué)雜志;2013年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王穎;楊慧蘭;樊建勇;;人源性單純皰疹病毒Ⅱ型抗gD蛋白噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建[A];2006中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊乃娣;全人源胃癌噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建及其初步篩選[D];浙江大學(xué);2010年

，

本文編號：838122