發(fā)布時(shí)間：2017-09-11 08:36

  本文關(guān)鍵詞：具有H274Y突變的2009大流行H1N1協(xié)同耐藥突變株生物學(xué)特性研究

  更多相關(guān)文章： 神經(jīng)氨酸酶 真核表達(dá) 酵母展示 活病毒感染 流感病毒 神經(jīng)氨酸酶抑制劑 耐藥突變 協(xié)同作用

【摘要】：第一部分神經(jīng)氨酸酶表面展示方法的建立 目的建立有效的甲流病毒神經(jīng)氨酸酶表面展示方法。 方法利用真核表達(dá)、活病毒感染、酵母展示系統(tǒng)獲得表面展示的NA，用熒光發(fā)光法檢測(cè)神經(jīng)氨酸酶（NA）酶學(xué)特性，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其與候選抗體3種抗體的親和力。 結(jié)果真核表達(dá)、酵母展示系統(tǒng)均可以使神經(jīng)氨酸酶在表面展示，且具有與活病毒NA相似的特性。在候選的3種抗體中，真核表達(dá)以及病毒的NA可1、3號(hào)抗體結(jié)合，病毒的NA還能與3號(hào)抗體結(jié)合；而酵母展示系統(tǒng)的NA與3種抗體均不能結(jié)合。 結(jié)論活病毒感染系統(tǒng)適合用于NA表面展示，抗體1和3均可用于檢測(cè)NA表面表達(dá)。 第二部分具有H274Y突變的2009大流行H1N1協(xié)同耐藥突變株生物學(xué)特性初步研究 目的研究具有H274Y突變2009大流行H1N1協(xié)同耐藥突變株病毒繁殖能力、NA酶學(xué)特性。 方法采用反向遺傳學(xué)和定點(diǎn)突變獲得A/California/04/2009(CA04)野生型以及7個(gè)突變毒株(H274Y, I222R, I222T, I222K, I222R+H274Y,I222K+H274Y, I222T+H274Y)。用熒光發(fā)光法檢測(cè)NA性能，流式細(xì)胞儀檢測(cè)NA表面展示，通過生長(zhǎng)曲線測(cè)定了解病毒的繁殖能力。 結(jié)果與野生型相比，，I222T單突變對(duì)奧司他韋的敏感性下降，但并不影響病毒的生長(zhǎng)以及NA表面展示和酶活。I222K/R突變對(duì)兩種神經(jīng)氨酸酶抑制劑敏感性下降，但是病毒的生長(zhǎng)力也降低。I222K/R突變與H274Y對(duì)奧司他韋、扎那米韋都有協(xié)同耐藥作用，且突變株生長(zhǎng)力降低明顯，NA表面展示和酶活也降低；而I222T+H274Y突變僅對(duì)奧司他韋有協(xié)同耐藥作用，病毒生長(zhǎng)力和NA表面展示以及酶活并沒受影響。 結(jié)論2009大流行H1N1的I222R/K/T突變與H274Y有協(xié)同耐藥，且影響病毒的生物學(xué)特性。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)氨酸酶 真核表達(dá) 酵母展示 活病毒感染 流感病毒 神經(jīng)氨酸酶抑制劑 耐藥突變 協(xié)同作用
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R373.13
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-15
• 參考文獻(xiàn)14-15
• 第一部分 神經(jīng)氨酸酶表面展示方法的建立15-24
• 1 材料與方法15-19
• 2 結(jié)果19-21
• 3 討論21-22
• 4 小結(jié)22-23
• 參考文獻(xiàn)23-24
• 第二部分 具有 H274Y 突變的 2009 大流行 H1N1 協(xié)同耐藥突變株生物學(xué)特性研究24-45
• 1 材料與方法25-34
• 2 結(jié)果34-39
• 3 討論39-42
• 4 小結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 文獻(xiàn)綜述45-54
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 致謝54-55
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文55-56

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