本文關(guān)鍵詞：let-7e對(duì)PBMCs和原代單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-10的影響

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【摘要】：目的研究let-7e對(duì)PBMCs和原代單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-10的影響。方法生物信息學(xué)分析let-7e的靶基因并通過熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證;用1μg/ml或10μg/ml LPS刺激PBMCs和原代單核細(xì)胞24、48和72 h后,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-10的質(zhì)量濃度,篩選出LPS最佳刺激時(shí)間和質(zhì)量濃度;用let-7e mimic或陰性對(duì)照(NC)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PBMCs和原代單核細(xì)胞24、36和48 h后,q RT-PCR和免疫熒光法檢測(cè)其轉(zhuǎn)染效率;轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)LPS刺激后,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-10的質(zhì)量濃度。結(jié)果 let-7e可能直接靶向抑制IL-10;1μg/ml LPS刺激細(xì)胞24 h即可產(chǎn)生較高水平的IL-10;瞬轉(zhuǎn)let-7e mimic 24 h即可使細(xì)胞高表達(dá)let-7e;let-7e mimic組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-10的質(zhì)量濃度低于let-7e NC組。結(jié)論 let-7e可抑制PBMCs和原代單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-10。
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院廣東省器官捐獻(xiàn)與移植免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中山醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： let-e IL- LPS 炎癥
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30872350,31370870) 廣東省自然科學(xué)基金(S2012010009050,S2013020013000,S81510008901000017) 廣東省科技計(jì)劃(2010B050700008,2011B040300022,2013A020229003) 廣州市科技計(jì)劃(11C32060749,2011J4100084,2008Z1-E221) 2010年中山大學(xué)高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)青年培育項(xiàng)目(10ykpy31) 廣東省器官捐獻(xiàn)與移植免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)項(xiàng)目(2013A061401007)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 1材料與方法 1.8實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(q RT-PCR) 根據(jù)制造商的使用說明使用TRIzol試劑提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行q RT-PCR檢測(cè)let-7e的表達(dá)量。 PCR擴(kuò)增條件為:95 ℃預(yù)變性30 s,然后95 ℃ 5 s、60 ℃ 30 s進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。 每個(gè)樣重復(fù)3次。 融解曲線分析:溫度65~95 ℃。 以U6作為內(nèi)

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本文編號(hào)：820390