發(fā)布時間：2017-09-09 12:17

  本文關(guān)鍵詞：let-7e對PBMCs和原代單核細胞產(chǎn)生IL-10的影響

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【摘要】：目的研究let-7e對PBMCs和原代單核細胞產(chǎn)生IL-10的影響。方法生物信息學分析let-7e的靶基因并通過熒光素酶報告實驗進行驗證;用1μg/ml或10μg/ml LPS刺激PBMCs和原代單核細胞24、48和72 h后,ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-10的質(zhì)量濃度,篩選出LPS最佳刺激時間和質(zhì)量濃度;用let-7e mimic或陰性對照(NC)瞬時轉(zhuǎn)染PBMCs和原代單核細胞24、36和48 h后,q RT-PCR和免疫熒光法檢測其轉(zhuǎn)染效率;轉(zhuǎn)染細胞經(jīng)LPS刺激后,ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-10的質(zhì)量濃度。結(jié)果 let-7e可能直接靶向抑制IL-10;1μg/ml LPS刺激細胞24 h即可產(chǎn)生較高水平的IL-10;瞬轉(zhuǎn)let-7e mimic 24 h即可使細胞高表達let-7e;let-7e mimic組細胞培養(yǎng)上清中IL-10的質(zhì)量濃度低于let-7e NC組。結(jié)論 let-7e可抑制PBMCs和原代單核細胞產(chǎn)生IL-10。
【作者單位】： 中山大學附屬第一醫(yī)院廣東省器官捐獻與移植免疫重點實驗室;中山醫(yī)學院免疫學研究所;
【關(guān)鍵詞】： let-e IL- LPS 炎癥
【基金】：國家自然科學基金(30872350,31370870) 廣東省自然科學基金(S2012010009050,S2013020013000,S81510008901000017) 廣東省科技計劃(2010B050700008,2011B040300022,2013A020229003) 廣州市科技計劃(11C32060749,2011J4100084,2008Z1-E221) 2010年中山大學高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費青年培育項目(10ykpy31) 廣東省器官捐獻與移植免疫重點實驗室建設(shè)項目(2013A061401007)
【分類號】：R392
【正文快照】： 1材料與方法 1.8實時熒光定量PCR法(q RT-PCR) 根據(jù)制造商的使用說明使用TRIzol試劑提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄后進行q RT-PCR檢測let-7e的表達量。 PCR擴增條件為:95 ℃預(yù)變性30 s,然后95 ℃ 5 s、60 ℃ 30 s進行40個循環(huán)。 每個樣重復(fù)3次。 融解曲線分析:溫度65~95 ℃。 以U6作為內(nèi)

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本文編號：820390