Edu標(biāo)記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
發(fā)布時(shí)間:2017-09-07 05:34
本文關(guān)鍵詞:Edu標(biāo)記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
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【摘要】:目的:使用不同濃度的Edu標(biāo)記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,探討Edu標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的最佳濃度及時(shí)間組合。方法:(1)采用全骨髓貼壁法分離純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和表面標(biāo)記物,成骨成脂分化誘導(dǎo)鑒定。(2)分別采用0,10,20,50umol/L濃度的Edu及12,24,48,72h等不同時(shí)間標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,流式細(xì)胞儀測(cè)定標(biāo)記率。檢測(cè)各濃度、各時(shí)間點(diǎn)Edu標(biāo)記細(xì)胞的陽(yáng)性率,觀察標(biāo)記后細(xì)胞形態(tài),并繪制標(biāo)記細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線以及進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記后細(xì)胞活性檢測(cè),增殖及誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn),并篩選最優(yōu)的標(biāo)記濃度組合。結(jié)果:(1)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定:形態(tài)學(xué)特征:接種24-48h后,出現(xiàn)貼壁細(xì)胞,多為圓形、短梭型、多角形,傳至第三代時(shí)細(xì)胞形態(tài)均一,呈單層貼壁生長(zhǎng),細(xì)胞多為長(zhǎng)梭形,呈旋渦狀排列;流式細(xì)胞檢測(cè)其表面標(biāo)記物CD90、CD29、CD45和CD11b表達(dá)分別為94.3%、99.4%、3.2%、5.7%;經(jīng)成脂誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)14天后油紅O染色,倒置顯微鏡下觀察可見(jiàn)橘紅色脂滴,經(jīng)成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)21天后茜素紅染色,鏡下可見(jiàn)橘紅色鈣結(jié)節(jié),堿性磷酸酶染色,鏡下可見(jiàn)藍(lán)紫色鈣結(jié)節(jié)形成。(2)各濃度組標(biāo)記率隨標(biāo)記時(shí)間延長(zhǎng)而升高(P0.05);各時(shí)間點(diǎn)標(biāo)記率隨標(biāo)記濃度的升高而增加,但其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。通過(guò)各實(shí)驗(yàn),得出最適濃度組合10umoI/L,48h。結(jié)論:Edu標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞簡(jiǎn)單有效,體外標(biāo)記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的最佳組合是10umol/L,48h。對(duì)進(jìn)一步研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植在組織工程作用有一定的實(shí)際意義。
【關(guān)鍵詞】:5-乙炔基-2'脫氧尿嘧啶核苷 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞標(biāo)記
【學(xué)位授予單位】:新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類(lèi)號(hào)】:R329
【目錄】:
- 中英文縮略詞對(duì)照表5-7
- 摘要7-8
- Abstract8-10
- 前言10-13
- 材料與方法13-25
- 結(jié)果25-35
- 討論35-42
- 小結(jié)42-43
- 致謝43-44
- 參考文獻(xiàn)44-48
- 綜述48-56
- 參考文獻(xiàn)53-56
- 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)位論文56-57
- 導(dǎo)師評(píng)閱表57
【參考文獻(xiàn)】
中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條
1 朱偉民;王大平;熊建義;;骨組織工程支架材料的生物學(xué)特性及臨床應(yīng)用[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年48期
2 彭偉;劉鄭榮;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在IgA腎病大鼠腎臟中的定位與分布[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年23期
,本文編號(hào):807707
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