本文關(guān)鍵詞：Cdx1在小鼠胚胎心外膜細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用研究

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【摘要】：尾型同源盒基因1(Caudal type homeobox1, Cdxl)屬于同源異型盒基因(Homeobox gene)家族,在早期胚胎發(fā)育中表達(dá),調(diào)節(jié)形態(tài)發(fā)生,促進(jìn)胚胎前后體軸模式建成,并在心臟發(fā)育中具有一定的調(diào)控作用。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)Cdx1在小鼠胚胎發(fā)育E11.5天的心臟中高表達(dá),而E11.5天之后,Cdx1下降到與之前一樣的低表達(dá)水平。通過(guò)構(gòu)建Cdx1條件誘導(dǎo)性過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠、建立體外原代心外膜細(xì)胞的分離和培養(yǎng)體系、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)特異性的基因表達(dá)分析以及對(duì)EMT相關(guān)蛋白的免疫熒光檢測(cè),我們發(fā)現(xiàn)Cdx1過(guò)表達(dá)使原代心外膜細(xì)胞發(fā)生EMT,并促進(jìn)心外膜源細(xì)胞(epicardial-derived cells, EPDCs)向血管平滑肌細(xì)胞分化。通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),我們證明Cdx1低劑量過(guò)表達(dá)促進(jìn)心外膜源細(xì)胞的遷移,而高劑量或用siRNA抑制Cdx1的表達(dá)后則抑制心外膜源細(xì)胞的遷移。在整體心臟培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)Cdx1短時(shí)間低劑量過(guò)表達(dá)能顯著促進(jìn)心外膜細(xì)胞向心肌層遷移。進(jìn)一步的轉(zhuǎn)錄組水平的表達(dá)分析表明Cdx1過(guò)表達(dá)確實(shí)引起了與EMT相關(guān)的細(xì)胞粘附、細(xì)胞形態(tài)變化等相關(guān)基因的顯著變化,并且發(fā)現(xiàn)Cdx1在一些基因的啟動(dòng)子上有結(jié)合。通過(guò)以上體外和體內(nèi)水平上的實(shí)驗(yàn)研究,我們發(fā)現(xiàn)Cdxl在胚胎期E11.5天心臟中高表達(dá),促進(jìn)心外膜細(xì)胞發(fā)生EMT并向心肌層遷移分化,進(jìn)而影響冠狀動(dòng)脈的血管平滑肌細(xì)胞的生成,而后者有可能進(jìn)一步促進(jìn)冠狀動(dòng)脈的形成以及心肌層的增厚。這些研究對(duì)進(jìn)一步分析Cdx1基因在胚胎心臟發(fā)育、冠狀動(dòng)脈形成以及相關(guān)疾病發(fā)生中的基本作用提供了重要依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：尾型同源盒基因1(Cdx1) 心外膜細(xì)胞 心外膜源細(xì)胞(EPDCs) 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R321
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-28
• 1. 上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)換(EMT)11-18
• 1.1 EMT概念及研究簡(jiǎn)述11-14
• 1.2 EMT的分類及其在發(fā)育和疾病發(fā)生中的作用14-17
• 1.3 EMT發(fā)生的分子機(jī)制17-18
• 2. 胚胎心臟發(fā)育及其過(guò)程中的EMT18-22
• 2.1 胚胎心臟發(fā)育過(guò)程18-20
• 2.2 胚胎心臟發(fā)育和疾病發(fā)生過(guò)程中的EMT20-22
• 3. Cdx1基因研究現(xiàn)狀22-28
• 3.1 Cdx/Hox基因的研究簡(jiǎn)介22-24
• 3.2 Cdx1在發(fā)育和疾病發(fā)生中的功能24-26
• 3.3 Cdx1在心臟發(fā)育和疾病中的研究26-28
• 第二章 材料與方法28-54
• 1 轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建28-30
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料與溶液配制28-29
• 1.2 實(shí)驗(yàn)步驟29-30
• 2 感受態(tài)細(xì)胞制備、質(zhì)粒提取、凝膠回收、酶切與連接、質(zhì)粒與連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化30-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與溶液配制30-32
• 2.2 實(shí)驗(yàn)步驟32-36
• 3 RNA抽提、反轉(zhuǎn)錄、RT-PCR、QPCR、引物設(shè)計(jì)36-41
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與溶液配制36-37
• 3.2 實(shí)驗(yàn)步驟37-41
• 4 小鼠胚胎原代心外膜細(xì)胞的獲得及培養(yǎng)41-43
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料與溶液配制41
• 4.2 實(shí)驗(yàn)步驟41-43
• 5 Cdx1過(guò)表達(dá)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血管平滑肌細(xì)胞(aSMA~+)和細(xì)胞連接分子(β-catenin)變化43-45
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料與溶液配制43-44
• 5.2 實(shí)驗(yàn)步驟44-45
• 6 Cdx1 siRNA-KD后細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)血管平滑肌細(xì)胞(aSMA~+)的變化45-47
• 6.1 實(shí)驗(yàn)材料與溶液配制45-46
• 6.2 實(shí)驗(yàn)步驟46-47
• 7 Cdxl過(guò)表達(dá)后細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移47-48
• 7.1 實(shí)驗(yàn)材料與溶液配制47
• 7.2 實(shí)驗(yàn)步驟47-48
• 8 Cdx1 siRNA-KD后細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力48-49
• 8.1 實(shí)驗(yàn)材料與溶液配制48
• 8.2 實(shí)驗(yàn)步驟48-49
• 9 胚胎心臟培養(yǎng)和CMFDA標(biāo)記、組織免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移49-53
• 9.1 實(shí)驗(yàn)材料與溶液配制49-50
• 9.2 實(shí)驗(yàn)步驟50-53
• 10 RNA-seq樣品制備53
• 10.1 實(shí)驗(yàn)材料與溶液配制53
• 10.2 實(shí)驗(yàn)步驟53
• 11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析53-54
• 第三章 結(jié)果與分析54-72
• 1 條件誘導(dǎo)性過(guò)表達(dá)Cdx1~(Tg)rtTA(+/+)轉(zhuǎn)基因小鼠工作原理及交配方案54-56
• 2 原代心外膜細(xì)胞的分離和培養(yǎng)體系的建立與鑒定56-59
• 3 Cdx1過(guò)表達(dá)使原代心外膜細(xì)胞發(fā)生EMT59-61
• 4 Cdx1過(guò)表達(dá)促進(jìn)心外膜源細(xì)胞向血管平滑肌細(xì)胞(aSMA~+)的分化61-63
• 5 Cdx1 siRNA-KD抑制心外膜源細(xì)胞向血管平滑肌細(xì)胞(aSMA~+)的分化63-65
• 6 Cdx1 siRNA-KD抑制心外膜源細(xì)胞的遷移65-67
• 7 心臟培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明Cdxl的瞬時(shí)表達(dá)促進(jìn)心外膜細(xì)胞遷移67-69
• 8 RNA-seq結(jié)果分析69-71
• 9 Cdx1在心外膜發(fā)育中表達(dá)和作用功能的模型71-72
• 第四章 總結(jié)與討論72-79
• 第五章 結(jié)論79-80
• 附錄一 引物序列信息80-81
• 附錄二 碩士期間取得的科研成果81-82
• 參考文獻(xiàn)82-91
• 致謝與后記91-95

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 魯映映;李一文;;心外膜和心外膜源細(xì)胞在心臟缺血修復(fù)治療中的作用[J];國(guó)際心血管病雜志;2013年05期

2 馮娜;蘇娟;田沛;朱海英;胡以平;;肝臟細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[J];生命的化學(xué);2012年06期

3 曹景利;朱學(xué)良;;上皮細(xì)胞極性的建立和維持[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2010年02期

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本文編號(hào)：789272