本文關(guān)鍵詞：EV71病毒兩種結(jié)構(gòu)形式的免疫學(xué)特性比較

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【摘要】：手足口病于近年來(lái)頻繁爆發(fā)于我國(guó)及周邊亞太地區(qū),世界上大部分地區(qū)也均有流行報(bào)道,已成為了一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生安全難題。腸道病毒71型(EV71))是小RNA病毒科腸道屬成員,同時(shí)也是手足口病(hand foot and mouth disease, HFMD)的主要病原體之一。由于目前尚無(wú)有效治療藥物,因此EV71的免疫學(xué)特性及其疫苗研究日益受到重視。 現(xiàn)有的資料已證實(shí),EV71具有典型的20面體外殼結(jié)構(gòu),由其正鏈RNA基因組所編碼形成的多聚蛋白鏈經(jīng)不同階段酶解形成了4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白VP1, VP2, VP3和VP4。這一結(jié)構(gòu)十分類(lèi)似于小RNA病毒屬的其他病毒的結(jié)構(gòu)特征,如脊灰病毒,導(dǎo)致其在細(xì)胞內(nèi)可能形成類(lèi)似脊灰病毒C抗原顆粒和D抗原顆粒的實(shí)體結(jié)構(gòu)及空殼結(jié)構(gòu),因此,本文相關(guān)的工作是基于滅活疫苗開(kāi)發(fā)中,病毒結(jié)構(gòu)與免疫學(xué)特征相關(guān)研究的需求,于5個(gè)時(shí)間點(diǎn)(10h、16h、22h、28h和34h)收集EV71感染的KMB17細(xì)胞,并進(jìn)行密度梯度離心獲得EV71的兩種結(jié)構(gòu)形式,然后利用透射電鏡觀察EV71病毒的兩種顆粒形態(tài),應(yīng)用親和素-生物素的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(BA-ELISA)測(cè)定病毒抗原量,使用病毒微量滴定法測(cè)定病毒感染性滴度,SDS-PAGE電泳及Western Blot檢測(cè)兩種顆粒在蛋白結(jié)構(gòu)組成上的差異,并分別用5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的EV71兩種顆粒形式免疫ICR小鼠,研究EV71病毒兩種結(jié)構(gòu)形式的免疫學(xué)特性,同時(shí)進(jìn)行了乳鼠保護(hù)性實(shí)驗(yàn)分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),透射電鏡中離心后位于上層的病毒結(jié)構(gòu)組分基本以空殼衣殼顆粒形式存在,而位于下層的病毒結(jié)構(gòu)組分則以實(shí)心顆粒為主,后期伴以空殼顆粒存在,同時(shí)感染動(dòng)力學(xué)分析表明,實(shí)心顆粒維持明顯上升的趨勢(shì),其感染性滴度相較空殼顆粒高2-3個(gè)log值,ELISA顯示隨著病毒感染的過(guò)程,兩種結(jié)構(gòu)形式的抗原滴度均呈增加的趨勢(shì),SDS-PAGE膠檢測(cè)發(fā)現(xiàn)實(shí)心顆粒中VP0均已裂解形成VP2和VP4,而空殼顆粒其中的VP0依然以VP0成分為主。與下層毒粒相比,以空殼顆粒為主要表現(xiàn)形式的上層毒粒具有同樣的抗原性及較低的感染性,但二者均可誘導(dǎo)動(dòng)物的抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)；雖然下層毒粒成分誘導(dǎo)中和抗體效價(jià)(GMT)的能力顯著高于上層顆粒,但免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種結(jié)構(gòu)形式成分都具有100%的免疫保護(hù)效率,提示二者均能誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生免疫反應(yīng)及有效的免疫記憶。 對(duì)EV71病毒結(jié)構(gòu)特征的分析提示,兩種毒粒結(jié)構(gòu)形式的直觀區(qū)別明顯集中于實(shí)心和空殼顆粒之分,VP0裂解為VP2和VP4與否亦是二者的重要差別,而EV71增殖過(guò)程中形成的兩種結(jié)構(gòu)形式在作為病毒疫苗抗原用于免疫時(shí),均具有免疫學(xué)的意義。
【關(guān)鍵詞】：EV71 上層毒粒 下層毒粒 免疫原性
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 引言7-22
• 一、實(shí)驗(yàn)材料和方法22-33
• (一)、實(shí)驗(yàn)材料22-23
• (二)、實(shí)驗(yàn)方法23-33
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析33-39
• (一)、EV71病毒增殖過(guò)程中兩種結(jié)構(gòu)形式形成的動(dòng)力學(xué)特征33-34
• (二)、EV71病毒兩種結(jié)構(gòu)形式的抗原性34-36
• (三)、EV71病毒兩種結(jié)構(gòu)形式的免疫原性分析36-38
• (四)、EV71病毒兩種結(jié)構(gòu)形式的免疫保護(hù)效率38-39
• 三、討論39-42
• 四、小結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 論文綜述50-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 附錄一 主要縮略詞表57-58
• 附錄二 主要溶液配制表58-61
• 致謝61-62
• 研究生簡(jiǎn)歷62-63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：787784