本文關(guān)鍵詞：孕馬尿雌酮硫酸鈉單抗研制及其檢測試紙條制備方法研究

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【摘要】：目的：研制雌酮硫酸鈉單克隆抗體，研究建立檢測孕馬尿中雌酮硫酸鈉的簡單，快速，方便的膠體金免疫層析試紙條的方法，為馬產(chǎn)業(yè)后續(xù)的工作提供所收集的每一批尿液中結(jié)合雌激素的初步檢測含量。方法：1.選擇12只6~8周齡的BALB/c雌性小鼠進行免疫，研究了免疫方式、免疫劑量及免疫次數(shù)對免疫效價的影響。2.選擇6只BALB/c雌性小鼠，以200/100μg/只，免疫四次。用ELISA法篩選血清效價高，高抗體敏感性的小鼠。3.在50%聚乙二醇1450(PEG)的作用下，將高效價小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞進行融合(脾細胞：骨髓瘤細胞=10:1)并接種于24h前準備的飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)板中，HAT培養(yǎng)液對融合細胞進行選擇性培養(yǎng)，用ELISA法對雜交瘤細胞進行篩選、鑒定。4.采用辛酸-飽和硫酸銨法粗純化腹水結(jié)合蛋白A親和層析法純化腹水，，測定腹水抗體。5.采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液。用所制膠體金溶液標記抗ESS單克隆抗體，建立膠體金免疫層析快速檢測孕馬尿中ESS的方法，并通過檢測孕馬尿中雌酮硫酸鈉來確證它的特異性和靈敏度。結(jié)果：1.融合率達90.2%，ELISA篩選陽性率為4.4%，并篩得兩株特異性和敏感性均較好的細胞株2C8和8A7擴大培養(yǎng)后制備腹水單抗。純化后的腹水單抗2C8和8A7蛋白濃度分別為3.12mg/mL，3.57mg/mL。經(jīng)ELISA法檢測得2C8，8A7的腹水效價分別為1:1.02×10~5，1:2.05×10~5。競爭ELISA檢測2C8和8A7兩株腹水單抗的IC50值為12.5ng/mL。8A7單抗與ESS結(jié)構(gòu)相似的雌激素進行交叉反應(yīng)性檢測，與馬烯雌酮硫酸鈉有一定的交叉反應(yīng)，與其他雌激素無交叉反應(yīng)。2.所制備膠體金溶液的膠體金粒徑大小紫外掃描后計算判定是19.76nm；最適抗體標記量為8μg/mL，最佳標記pH為8.2。質(zhì)控線羊抗小鼠IgG包被濃度為2mg/mL，每條1.5μL；檢測線ESS-Mab的包被濃度為0.5mg/mL，每條1.5μL；檢測ESS標準品靈敏度為50ng/mL；特異性比多克隆抗體膠體金試紙條提高。結(jié)論：本課題首先建立了動物免疫方法，并研制出抗雌酮硫酸鈉單克隆抗體，初步建立了檢測孕馬尿中雌酮硫酸鈉的簡單快速，方便的膠體金ESS單克隆抗體免疫層析試紙條的方法。
【關(guān)鍵詞】：雌酮硫酸鈉 單克隆抗體 膠體金免疫層析法 酶聯(lián)免疫吸附法
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 英文縮略詞對照表5-8
• 摘要8-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-14
• 研究內(nèi)容14-55
• 1. 雌酮硫酸鈉單克隆抗體的制備14-46
• 1.1 試劑、材料及儀器14-18
• 1.2 試驗方法18-34
• 1.3 結(jié)果34-44
• 1.4 討論44-46
• 2. 雌酮硫酸鈉單抗時紙條研制46-55
• 2.1 試劑、材料及儀器46
• 2.2 試驗方法46-50
• 2.3 結(jié)果50-53
• 2.4 討論53-55
• 小結(jié)55-56
• 致謝56-57
• 參考文獻57-62
• 綜述62-69
• 參考文獻66-69
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)位論文69-70
• 導(dǎo)師評閱表70

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王永成,常文保,郭振泉;雌三醇單克隆抗體的制備與表征[J];北京大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2002年04期

2 王鵬;石麗媛;郭英;杜春紅;尹家祥;黃鵬;鐘佑宏;董珊珊;吳明壽;于國林;;檢測鼠疫抗體膠體金免疫層析試紙條的研制[J];地方病通報;2006年02期

3 富青,李川江;膠體金免疫層析半定量檢測方法的研究[J];湖北預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2002年05期

4 劉先利,劉彬,吳峰,鄧南圣;環(huán)境雌激素及其降解途徑[J];環(huán)境科學(xué)與技術(shù);2003年04期

5 周昕;王江濤;趙志超;;GC法測定青島某水體中雌激素含量[J];分析測試技術(shù)與儀器;2006年02期

6 金聲,周浣芳,常文保,慈云祥,郭振泉;酶聯(lián)免疫吸附法直接測定血清雌二醇[J];分析化學(xué);1994年02期

7 常文保,張柏林,慈云祥;藥物免疫分析及其進展[J];分析化學(xué);1994年11期

8 劉風華，劉鋒，鄧延倬，曾云鶚，卓仁禧;現(xiàn)代免疫分析技術(shù)研究進展[J];分析科學(xué)學(xué)報;1995年01期

9 楊杏芬;環(huán)境雌激素污染與毒效應(yīng)研究的現(xiàn)狀與展望[J];廣東衛(wèi)生防疫;2001年01期

10 金士威;徐盈;惠陽;廖濤;;污水中8種雌激素化合物的定量測定[J];中國給水排水;2005年12期

本文編號：785263