本文關(guān)鍵詞：SELEX技術(shù)篩選鈣通道特異性核酸適配體及其抗肥大細(xì)胞活化的作用

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【摘要】：目的篩選針對(duì)Orai1分子第1膜外區(qū)蛋白的核酸適配體,探討適配體通過(guò)拮抗鈣離子釋放激活通道(Ca2+release activation channel,CRAC)抑制肥大細(xì)胞活化的效應(yīng)。方法構(gòu)建隨機(jī)單鏈DNA文庫(kù),利用不對(duì)稱PCR對(duì)單鏈DNA文庫(kù)進(jìn)行擴(kuò)增。采用聚苯乙烯酶聯(lián)板為介質(zhì)的指數(shù)富集配體系統(tǒng)進(jìn)化(systematic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX)技術(shù)篩選核酸適配體。利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各輪篩選序列與靶蛋白的親和力,驗(yàn)證適配體與靶蛋白的特異性結(jié)合;激光共聚焦顯微鏡觀察適配體對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化的影響;利用IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫顆粒模型,觀察適配體對(duì)β-氨基己糖苷酶釋放的抑制效應(yīng)。結(jié)果經(jīng)過(guò)12輪SELEX篩選,獲得了7條核酸適配體,其中AptamerY1解離常數(shù)(Kd值)為1.72×10-8mol/L。以終濃度2μg/mL的AptamerY1可抑制由IgE介導(dǎo)的人肥大細(xì)胞系LAD2鈣離子內(nèi)流,并對(duì)LAD2細(xì)胞的β-氨基己糖苷酶釋放抑制率達(dá)95%。結(jié)論通過(guò)SELEX篩選,獲得了7條針對(duì)Orai1分子第1膜外區(qū)的核酸適配體,所獲得適配體可對(duì)肥大細(xì)胞LAD2鈣內(nèi)流有效抑制,進(jìn)而抑制肥大細(xì)胞活化和β-氨基己糖苷酶的釋放。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所皮膚科;第三軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系藥理學(xué)教研室;第三軍醫(yī)大學(xué)軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)院全軍復(fù)合傷研究所 創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 肥大細(xì)胞 SELEX適體技術(shù) 鈣離子釋放激活通道 β-氨基己糖苷酶
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30972647)~~
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 2006年Feske等[1]識(shí)別出一種新蛋白,命名為Orai1,證實(shí)了Orai1蛋白是鈣離子釋放激活通道(Ca2+release activation channel,CRAC)的組成部分。20世紀(jì)90年代,SELEX技術(shù)[2]問(wèn)世,由此獲得的適配體可與靶分子高特異性和高親和力地結(jié)合。適配體的另外一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是沒(méi)有免疫原性[3],故在

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 謝琳;劉韌;朱旭東;賀翔鴿;陳彩宇;;人重組TGF-β RⅡ親和核酸篩選方法的建立[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年23期

2 郭杰標(biāo);郭銳;劉艷華;;以抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原測(cè)定單抗親和力常數(shù)的研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年07期

3 孫仁山,陳曉紅,冉新澤,程天民;高親和力IgE受體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)及其相關(guān)的抑制性受體[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2005年04期

4 陸月明,李莉,羅文侗,張玲珍,孔憲濤;肥大細(xì)胞抗原活化時(shí)鈣離子信號(hào)變化的研究[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2000年04期

5 田紅英;符兆英;;SELEX技術(shù)的原理和核酸適配體在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用進(jìn)展[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年10期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李新軍;張竹君;易維京;陳安;李淑慧;趙忠顥;劉明棟;范毓東;胡川閩;;抗preS1分子高效單克隆抗體的制備及其在血清LHBs檢測(cè)中的應(yīng)用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年06期

2 鄭怡麟;何瑩;陳安;易維京;胡川閩;;抗人降鈣素原特異性單克隆抗體的制備鑒定及初步應(yīng)用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年06期

3 滿燕;呂雪飛;張玉奎;慶宏;鄧玉林;;核酸適配體及其在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2013年06期

4 畢華;丁有學(xué);王蘭;劉蘭;韓春梅;李永紅;饒春明;;ELISA法間接檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抑制劑的相對(duì)結(jié)合力[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2010年06期

5 王偉偉;王遠(yuǎn)征;張國(guó)強(qiáng);馬昱;;狂犬病病毒抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2011年11期

6 劉騰飛;楊代鳳;鄧金花;董明輝;鄧青青;;核酸適體的篩選制備及分析應(yīng)用[J];生物技術(shù)通報(bào);2013年04期

7 李淑娟;唐一通;;核酸藥物的研究與應(yīng)用[J];生物學(xué)雜志;2013年04期

8 劉婷先;張娜;;適配體在腫瘤治療方面的應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2013年05期

9 劉增娟;趙玉斌;;痛瀉要方抑制致敏大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒的研究[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2007年14期

10 歐德淵;喬健;張建軍;孫茂紅;董世山;;維拉帕米對(duì)肺動(dòng)脈高壓綜合征肉雞心、肺組織中肥大細(xì)胞的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2008年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王偉偉;張國(guó)強(qiáng);;狂犬病病毒抗體檢測(cè)中競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法廣譜包被抗原的選擇[A];2011中國(guó)生物制品年會(huì)暨第十一次全國(guó)生物制品學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 熊天琴;辛夷揮發(fā)油治療過(guò)敏性鼻炎的分子機(jī)理研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2003年

2 歐德淵;肥大細(xì)胞及其主要介質(zhì)在肉雞肺動(dòng)脈高壓綜合征中的作用研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

3 趙玉斌;健脾解毒化濁方治療腸易激綜合征的基礎(chǔ)及臨床研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

4 吳麗莎;蝦過(guò)敏原提取物量效關(guān)系的表征[D];中國(guó)海洋大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李新軍;抗preS1高特異性單克隆抗體的制備及其在血清LHBs檢測(cè)中的應(yīng)用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 秦慧迪;致敏原體外檢測(cè)模型的建立及在中藥注射液致敏性檢測(cè)中的應(yīng)用[D];山東大學(xué);2011年

3 劉保才;肝癌候選標(biāo)志物HCCR單克隆抗體制備及初步應(yīng)用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

4 劉曉艷;食物、花粉、青霉素等過(guò)敏病人血清特異性IgG抗體[D];鄭州大學(xué);2006年

5 張鴦;抗Zhangfei蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

6 高全達(dá);加味痛瀉要方對(duì)肝郁脾虛型D-IBS患者腸肥大細(xì)胞的影響及療效觀察[D];福建中醫(yī)學(xué)院;2008年

7 陳雯;百日咳絲狀血凝素（FHA）的純化、抗-FHA單克隆抗體的研制及初步應(yīng)用[D];武漢生物制品研究所;2010年

8 王偉偉;狂犬病病毒抗體酶聯(lián)診斷試劑的研制[D];北京生物制品研究所;2010年

9 張鵬;重金屬鉛單克隆抗體的制備及ELISA檢測(cè)方法的建立[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 叢珊;心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP）的原核表達(dá)、純化及其單克隆、多克隆抗體的制備與應(yīng)用研究[D];重慶師范大學(xué);2012年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 孫仁山,胡川閩,劉榮卿,王延江,胡厚祥;高親和力IgE受體α鏈cDNA的克隆及序列測(cè)定[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年02期

2 李海劍;劉章鎖;劉書真;程根陽(yáng);王沛;;羅格列酮對(duì)高糖條件下大鼠腎臟成纖維細(xì)胞TGF-β_1和PAI-1 mRNA表達(dá)的影響[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年01期

3 傅思武,周殿元,賴卓勝,薛凈;抗艱難梭菌A毒素單克隆抗體的制備及特性分析[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2004年03期

4 周幸春;宋朝君;王鑫;田瑩;金伯泉;;抗人BORIS單克隆抗體的制備及在乳腺疾病和正常乳腺組織中的分布[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2007年04期

5 柴錦燕;方佩華;;抗ICAM-1單克隆抗體在治療方面的研究進(jìn)展[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年12期

6 王剛垛,魚濤,馬兆揚(yáng),李秋生,何鳳生;甲基對(duì)硫磷單克隆抗體的研制及鑒定[J];中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志;2001年04期

7 王剛,王琰,化冰,喬媛媛,劉玉峰;鏈替換技術(shù)提高抗角蛋白人Fab抗體的親和力[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2001年02期

8 朱勇,金伯泉,劉雪松;用生物傳感器測(cè)定重組人α2a-干擾素單克隆抗體的親和力及抗原識(shí)別表位[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2000年06期

9 李革,熊杰,劉志峰;巨細(xì)胞病毒特異性IgG抗體親和力測(cè)定及其臨床意義[J];中國(guó)實(shí)用兒科雜志;2001年03期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 森田寬 ,張興權(quán);肥大細(xì)胞與嗜堿性細(xì)胞[J];國(guó)際呼吸雜志;1983年04期

2 王彤;何澤涌;;關(guān)于粘膜肥大細(xì)胞(綜述)[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1987年02期

3 馬桂林 ,郭永信;人類B細(xì)胞在IL-4的應(yīng)答中其表面IgM表達(dá)增加[J];國(guó)際免疫學(xué)雜志;1989年05期

4 ;干細(xì)胞因子誘導(dǎo)肥大細(xì)胞與纖維粘連蛋白粘附[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).免疫學(xué)分冊(cè);1994年06期

5 薄愛(ài)華,張竟時(shí),李海峰,夏苓,何丁,張靜,姜華,穆錚;大鼠實(shí)驗(yàn)性休克時(shí)腸系膜肥大細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;1992年01期

6 鄭浩,李卓婭,龔非力,姜曉丹,馮瑋,徐勇,熊平;跨膜型SCF與分泌型SCF對(duì)肥大細(xì)胞生物學(xué)功能影響的研究[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2001年08期

7 郭薇,陳玉川,劉水平,成建定;肥大細(xì)胞體外脫顆粒的檢測(cè)方法[J];中國(guó)病理生理雜志;2002年08期

8 鐘瑞沖;肥大細(xì)胞標(biāo)本制作法[J];贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年03期

9 王會(huì)珍,曲靜,宋衛(wèi)華,王周南;前列腺肥大組織中肥大細(xì)胞的光鏡與電鏡研究[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1999年04期

10 修清玉,楊丹榕,韓煥興,石昭泉,陸慧琦,周琳;FasL基因轉(zhuǎn)染對(duì)大鼠肥大細(xì)胞凋亡的影響[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2005年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊海偉;魏繼福;張偉;宋為娟;魏椺;何韶衡;;重組蟑螂過(guò)敏原rPer a 7對(duì)肥大細(xì)胞TLR受體的調(diào)控和細(xì)胞因子釋放[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)2009年全國(guó)變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

2 賈雪梅;賈友蘇;王惠珠;;大鼠淋巴結(jié)內(nèi)肥大細(xì)胞免疫組織化學(xué)研究[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

3 周衍東;方曉峰;崔宗杰;;A段紫外線在大鼠肥大細(xì)胞誘發(fā)胞漿鈣振蕩[A];第十一次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

4 林小平;趙海濤;陳萍;孫麗;馮新利;謝華;;rIL-12和rIFN-γ霧化吸入抑制過(guò)敏性氣道肥大細(xì)胞活化的實(shí)驗(yàn)研究[A];第一屆全國(guó)變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

5 張慧云;何韶衡;;TNF低凝血酶引起的肥大細(xì)胞蛋白酶激活受體表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)2010年全國(guó)變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中歐變態(tài)反應(yīng)高峰論壇參會(huì)指南/論文匯編[C];2010年

6 陳星云;趙艷;熊仁平;劉蘋;李平;周元國(guó);;LPA、LPS對(duì)P815細(xì)胞和大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒的影響[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2008年

7 王燕舞;孟運(yùn)蓮;羅善云;劉俊;;肥大細(xì)胞在大鼠輸卵管急性沙眼衣原體感染中的作用[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

8 馮四洲;卞壽庚;韓明哲;韓忠朝;;小鼠肥大細(xì)胞基因表達(dá)特征及新的絲氨酸蛋白酶基因MMCP-10克隆研究[A];第九屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

9 趙戰(zhàn)芝;楊永宗;王佐;萬(wàn)載陽(yáng);唐朝克;;肥大細(xì)胞對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞膽固醇/膽固醇酯構(gòu)成比及膽固醇流出的影響[A];第八次全國(guó)動(dòng)脈硬化性疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

10 左戎;王巧民;胡聞;;感染后腸易激綜合征患者結(jié)腸膜超微結(jié)構(gòu)的觀察及意義[A];第九次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議專題報(bào)告論文集[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 李山;肥大細(xì)胞處于免疫系統(tǒng)抗病第一線[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

2 江蘇省人民醫(yī)院 變態(tài)反應(yīng)研究所所長(zhǎng) 何韶衡邋周寧人 整理;讓蟑螂的致敏瀑布斷流[N];健康報(bào);2008年

3 記者 李學(xué)梅;脂肪組織或能生成免疫細(xì)胞[N];新華每日電訊;2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 郭潮波;人肥大細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞的臨床、細(xì)胞及分子水平研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1994年

2 譚會(huì)兵;后海穴抗原免疫的免疫增強(qiáng)作用及其機(jī)制研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1996年

3 張慧云;IL-12對(duì)肥大細(xì)胞蛋白酶激活受體表達(dá)和介質(zhì)分泌的影響[D];汕頭大學(xué);2007年

4 李洪濤;銅綠假單胞菌Quorum Sensing信號(hào)分子N-（3-oxododecanoyl）homoserine lactone對(duì)肥大細(xì)胞作用研究[D];華中科技大學(xué);2009年

5 王慶輝;骨髓來(lái)源的肥大細(xì)胞（BMMC）表面FcεRI表達(dá)調(diào)控及其生物學(xué)活性的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2010年

6 蘭思根;DBTC誘發(fā)大鼠慢性胰腺炎模型的建立及其胰腺炎纖維化發(fā)生機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2008年

7 喬麗雅;RNA干擾對(duì)P815細(xì)胞中PARs表達(dá)的影響的研究[D];汕頭大學(xué);2008年

8 張文健;人海綿狀血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞特性研究和人海綿狀血管瘤動(dòng)物模型的建立[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

9 楊翠蘭;抗小鼠TLR2抗體TSP-2抑制小鼠肥大細(xì)胞脫顆粒作用的初步研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

10 胡靜;組胺作為一種交感神經(jīng)遞質(zhì)的新證據(jù)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳曉宇;人胎小腸肥大細(xì)胞的發(fā)生與神經(jīng)肽分布和發(fā)育的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2002年

2 唐雅玲;Compound 48/80對(duì)apoE基因敲除小鼠頸總動(dòng)脈套環(huán)誘導(dǎo)斑塊的影響[D];南華大學(xué);2005年

3 樓湘瑩;人正常子宮內(nèi)膜MC、VEGF、TSP表達(dá)與毛細(xì)血管超微結(jié)構(gòu)研究[D];暨南大學(xué);2005年

4 張連霞;GM-CSF對(duì)肥大細(xì)胞蛋白酶激活受體表達(dá)和介質(zhì)分泌的影響及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路探討[D];汕頭大學(xué);2008年

5 劉婉瑩;體外釋放組胺肥大細(xì)胞模型在過(guò)敏原分析中的應(yīng)用[D];暨南大學(xué);2009年

6 謝林國(guó);間質(zhì)性膀胱炎動(dòng)物模型去勢(shì)對(duì)其膀胱肥大細(xì)胞的影響研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

7 貝寧;肥大細(xì)胞蛋白酶激活受體表達(dá)及功能初探[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

8 周芳燁;青春雙歧桿菌對(duì)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的影響[D];安徽理工大學(xué);2007年

9 林麗艷;IL-6對(duì)肥大細(xì)胞蛋白酶激活受體表達(dá)和細(xì)胞因子分泌的影響[D];汕頭大學(xué);2008年

10 趙戰(zhàn)芝;肥大細(xì)胞抑制HDL_3介導(dǎo)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞膽固醇流出的研究[D];南華大學(xué);2005年

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本文編號(hào)：780179