發(fā)布時(shí)間：2017-09-02 06:03

  本文關(guān)鍵詞：法尼醇對(duì)白念珠菌生物膜耐藥性的作用及PKC信號(hào)通路調(diào)空

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【摘要】：研究目的：本研究通過檢測(cè)法尼醇對(duì)白念珠菌生物膜藥物易感性、形態(tài)、麥角甾醇和葡聚糖含量變化、蛋白激酶C (Protein kinase C, PKC)信號(hào)通路相關(guān)基因及MKC1蛋白表達(dá)的作用，探討法尼醇作為一種抗微生物化學(xué)活性分子對(duì)白念珠菌生物膜耐藥性的作用及其調(diào)控機(jī)制。 研究方法：本研究分為白念珠菌法尼醇處理組、法尼醇未處理對(duì)照組和耐藥組，針對(duì)不同時(shí)相生物膜（6h、12h、24h、36h）進(jìn)行研究。研究采用下述方法探討法尼醇對(duì)白念珠菌生物膜耐藥相關(guān)生物學(xué)特點(diǎn)的作用：細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒（Cell Counting Kit-8, CCK-8）檢測(cè)白念珠菌生物膜最低抑菌濃度（Minimal Inhibitory Concentration, MIC）、掃描電鏡觀察生物膜形態(tài)、高效液相色譜法測(cè)定麥角甾醇含量、酵母β-葡聚糖檢測(cè)試劑盒測(cè)定葡聚糖含量。進(jìn)而，研究采用反轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR (q-PCR)分析法尼醇對(duì)PKC信號(hào)通路相關(guān)基因Pkc1、Bck1、Mkk2、Mkc1、Swi4、Hsp90表達(dá)的調(diào)控作用，并采用蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)法尼醇對(duì)MKC1p表達(dá)的作用。研究結(jié)果：采用氟康唑濃度梯度遞增法誘導(dǎo)的白念珠菌耐藥株，經(jīng)KONT真菌顯色MIC藥敏系統(tǒng)檢測(cè)，MIC≥64μg/mL，證明耐藥株誘導(dǎo)成功。經(jīng)外源性法尼醇處理后，CCK-8檢測(cè)發(fā)現(xiàn)生物膜在6h、12h、24h時(shí)MIC80值降低，而在36h時(shí)MIC80值無明顯變化；掃描電鏡結(jié)果顯示法尼醇處理組生物膜主要由大量短桿狀芽生孢子及少量的假菌絲組成，細(xì)胞表面形態(tài)發(fā)生改變；高效液相色譜法測(cè)定法尼醇處理組生物膜麥角甾醇含量降低；葡聚糖含量檢測(cè)試劑盒測(cè)定法尼醇處理組生物膜葡聚糖含量降低。RT-PCR結(jié)果顯示，在生物膜形成6h，法尼醇處理組Pkc1、Mkk2、Mkc1、Hsp90表達(dá)下調(diào)，Bck1和Swi4表達(dá)無明顯改變；在12h，法尼醇處理組Pkc1、Mkk2、Mkc1、Hsp90基因表達(dá)下調(diào)，Bck1和Swi4表達(dá)無明顯改變；在24h，法尼醇處理組Pkc1、Mkk2基因表達(dá)下調(diào)，，其他基因表達(dá)無明顯改變；在36h，法尼醇處理組Pkc1基因表達(dá)下調(diào)，其他基因表達(dá)無明顯改變。q-PCR分析顯示，在生物膜形成6h，法尼醇處理組Pkc1、Bck1、Mkk2、Mkc1、Swi4和Hsp90基因表達(dá)下調(diào)；在12h，法尼醇處理組Pkc1、Mkk2、Mkc1、Swi4和Hsp90基因表達(dá)下調(diào)；在24h，法尼醇處理組Pkc1和Mkk2基因表達(dá)下調(diào)，Swi4基因表達(dá)上調(diào)；在36h，法尼醇處理組基因表達(dá)上調(diào)。WesternBlot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在外源性法尼醇作用下，MKC1蛋白表達(dá)水平在生物膜6h、12h、24h時(shí)下調(diào)；在36h，MKC1蛋白表達(dá)水平無明顯差異。 結(jié)論：采用氟康唑濃度梯度遞增法成功建立了耐藥株模型。法尼醇的調(diào)控作用與生物膜形成時(shí)相相關(guān)：法尼醇可能通過抑制生物膜的形成、降低麥角甾醇及β-1,3葡聚糖的含量、調(diào)控PKC信號(hào)通路的部分基因和MKC1蛋白影響白念珠菌早期、中期生物膜耐藥性，但在成熟后期生物膜耐藥性無明顯變化。
【關(guān)鍵詞】：白念珠菌生物膜 法尼醇（farnesol） 耐藥性 蛋白激酶C (Protein kinase C PKC)信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R379.4;R446.5
【目錄】：

• 中英文對(duì)照表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 第一部分 氟康唑體外人工誘導(dǎo)白念珠菌耐藥株13-17
• 第二部分 法尼醇對(duì)白念珠菌生物膜耐藥性的作用17-28
• 第三部分 法尼醇對(duì)白念珠菌 PKC 信號(hào)通路調(diào)控的研究28-37
• 全文小結(jié)37-38
• 參考文獻(xiàn)38-45
• 文獻(xiàn)綜述45-56
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫長貴;曾賢銘;楊燕;;肉湯稀釋法酵母菌藥物敏感性試驗(yàn)及質(zhì)量控制介紹[J];江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn);2007年01期

本文編號(hào)：776782