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  本文關(guān)鍵詞：大鼠嗅鞘細(xì)胞的純化及活性檢測(cè)

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【摘要】：目的采用改良差速貼壁聯(lián)合胰酶限時(shí)消化法純化大鼠嗅鞘細(xì)胞,并檢測(cè)嗅鞘細(xì)胞的生物活性。方法分離新生7d的SD大鼠嗅球嗅鞘細(xì)胞,分組后采用改良的6h和18h兩次差速貼壁法聯(lián)合不同時(shí)段(1、3和5min)胰酶消化法純化培養(yǎng),觀察不同時(shí)段純化的嗅鞘細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)及生長(zhǎng)情況;應(yīng)用FITC標(biāo)記的神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體p75抗體(兔抗鼠NGFRp75抗體)檢測(cè)嗅鞘細(xì)胞并評(píng)估細(xì)胞純度;應(yīng)用CCK-8法和酶聯(lián)免疫吸附法分別檢測(cè)嗅鞘細(xì)胞在純化后3~15d的增殖活性和分泌腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的含量。結(jié)果隨著細(xì)胞的生長(zhǎng),梭形的嗅鞘細(xì)胞逐漸增多;改良差速貼壁聯(lián)合胰酶限時(shí)消化1min、3min、5min法所得嗅鞘細(xì)胞純度分別為(57.52±2.13)%、(78.95±2.60)%、(49.01±0.74)%,3min組最明顯,組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);改良差速貼壁法聯(lián)合胰酶限時(shí)消化1min、3min、5min法所得嗅鞘細(xì)胞在純化后7、9、11d時(shí)增殖的細(xì)胞數(shù)目和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分泌量顯示3min組最優(yōu),組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論改良差速貼壁(6h+18h)聯(lián)合胰酶限時(shí)消化3min的純化方法能獲得較高純度的嗅鞘細(xì)胞。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué);寧夏醫(yī)科大學(xué)人體解剖與組織胚胎學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 嗅鞘細(xì)胞 細(xì)胞純度 細(xì)胞增殖 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子
【基金】：銀川市科技發(fā)展項(xiàng)目(銀財(cái)發(fā)[2011]265號(hào)) 寧夏自治區(qū)科技支撐項(xiàng)目(寧科計(jì)字[2012]17號(hào)) 寧夏醫(yī)科大學(xué)博士建設(shè)開(kāi)放課題(KF2010-18)
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 嗅鞘細(xì)胞(olfactory ensheathing cells,OECs)是一種介于周圍神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的特殊神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,具有修復(fù)損傷神經(jīng)和促進(jìn)神經(jīng)再生的功能[1-3],可分泌各種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,如腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic fac-tor,BDNF)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素(neurotrophins,NT)

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本文編號(hào)：774441