發(fā)布時間：2017-09-01 02:38

  本文關(guān)鍵詞：DNA免疫法制備抗小鼠TIGIT多克隆抗體及其功能鑒定

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【摘要】：[目的]利用DNA免疫法制備抗小鼠TIGIT多克隆抗體。 [方法]運用生物信息學(xué)方法從基因數(shù)據(jù)庫（GenBank）獲取小鼠TIGIT基因序列,利用RT-PCR技術(shù)以小鼠脾臟cDNA為模板得到TIGIT基因片段，再利用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增出TIGIT編碼區(qū)的基因片段，并連接至pcDNA3.1(+)真核表達(dá)載體。運用基因克隆技術(shù)構(gòu)建TIGIT-pcDNA3.1(+)質(zhì)粒。測序無誤后，將TIGIT-pcDNA3.1(+)質(zhì)粒大量擴(kuò)增，，提取，純化。然后，通過股四頭肌肌內(nèi)注射分別于D0、D14和D28天免疫SD大鼠（100μ g/只），最后一次免疫后10天收獲血清。利用蛋白A+G瓊脂糖珠親和層析法純化抗血清得到多克隆抗體，最后，通過western blot和免疫組化技術(shù)鑒定其特異性。 [結(jié)果]成功免疫SD大鼠，western blot顯示于26Kd處可見明顯的蛋白條帶，與小鼠mTIGIT預(yù)測分子量相符，此結(jié)果證實制備的抗體可以與正常小鼠心、肝、脾、腎臟組織中表達(dá)的mTIGIT蛋白特異性結(jié)合。免疫組化發(fā)現(xiàn)mTIGIT蛋白廣泛存在于正常小鼠心、肝、脾、腎等臟器，并主要定位于毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞。 [結(jié)論]利用DNA肌內(nèi)免疫方法成功制備了特異性大鼠抗小鼠TIGIT多克隆抗體，為進(jìn)一步研究TIGIT分子在小鼠系統(tǒng)的表達(dá)和功能提供有效的工具。
【關(guān)鍵詞】：小鼠 TIGIT 質(zhì)粒免疫 多克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 英文縮略詞5-6
• 中文摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-10
• 實驗材料10-14
• 實驗方法14-29
• 實驗結(jié)果29-37
• 討論37-39
• 小結(jié)39-40
• REFERENCES40-41
• 綜述41-51
• References48-51
• 附錄51-52
• 致謝52

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：769469