發(fā)布時(shí)間：2017-09-01 02:38

  本文關(guān)鍵詞：DNA免疫法制備抗小鼠TIGIT多克隆抗體及其功能鑒定

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【摘要】：[目的]利用DNA免疫法制備抗小鼠TIGIT多克隆抗體。 [方法]運(yùn)用生物信息學(xué)方法從基因數(shù)據(jù)庫(kù)（GenBank）獲取小鼠TIGIT基因序列,利用RT-PCR技術(shù)以小鼠脾臟cDNA為模板得到TIGIT基因片段，再利用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增出TIGIT編碼區(qū)的基因片段，并連接至pcDNA3.1(+)真核表達(dá)載體。運(yùn)用基因克隆技術(shù)構(gòu)建TIGIT-pcDNA3.1(+)質(zhì)粒。測(cè)序無誤后，將TIGIT-pcDNA3.1(+)質(zhì)粒大量擴(kuò)增，，提取，純化。然后，通過股四頭肌肌內(nèi)注射分別于D0、D14和D28天免疫SD大鼠（100μ g/只），最后一次免疫后10天收獲血清。利用蛋白A+G瓊脂糖珠親和層析法純化抗血清得到多克隆抗體，最后，通過western blot和免疫組化技術(shù)鑒定其特異性。 [結(jié)果]成功免疫SD大鼠，western blot顯示于26Kd處可見明顯的蛋白條帶，與小鼠mTIGIT預(yù)測(cè)分子量相符，此結(jié)果證實(shí)制備的抗體可以與正常小鼠心、肝、脾、腎臟組織中表達(dá)的mTIGIT蛋白特異性結(jié)合。免疫組化發(fā)現(xiàn)mTIGIT蛋白廣泛存在于正常小鼠心、肝、脾、腎等臟器，并主要定位于毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞。 [結(jié)論]利用DNA肌內(nèi)免疫方法成功制備了特異性大鼠抗小鼠TIGIT多克隆抗體，為進(jìn)一步研究TIGIT分子在小鼠系統(tǒng)的表達(dá)和功能提供有效的工具。
【關(guān)鍵詞】：小鼠 TIGIT 質(zhì)粒免疫 多克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 英文縮略詞5-6
• 中文摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-10
• 實(shí)驗(yàn)材料10-14
• 實(shí)驗(yàn)方法14-29
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-37
• 討論37-39
• 小結(jié)39-40
• REFERENCES40-41
• 綜述41-51
• References48-51
• 附錄51-52
• 致謝52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王昌青;楊兵;;DNA疫苗研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2009年12期

2 楊麗琛;楊曉光;;DNA免疫研究進(jìn)展[J];衛(wèi)生研究;2006年01期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王璐;DNAM-1-nectin-2信號(hào)途徑介導(dǎo)人NK細(xì)胞對(duì)豬內(nèi)皮細(xì)胞直接殺傷作用的研究[D];華中科技大學(xué);2009年

本文編號(hào)：769469