本文關(guān)鍵詞：胚胎中腦神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)及分化條件探討

  更多相關(guān)文章： 神經(jīng)干細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 分化 白血病抑制因子

【摘要】：目的:探討神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)的培養(yǎng)方法以及各種條件對NSCs生長狀況的影響。方法:取SD大鼠胚胎中腦,在含細(xì)胞因子堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)和內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(epidermal growth factor,EGF)的無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)擴(kuò)增,得到的神經(jīng)球用神經(jīng)巢蛋白nestin抗體鑒定和5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,Brdu)摻入檢測增殖能力。血清誘導(dǎo)分化后用免疫熒光做星形膠質(zhì)細(xì)胞酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和神經(jīng)元特異性Ⅲ型微管蛋白(neuron-specific classⅢβ-tubulin,β-Ⅲ-tublin)的雙標(biāo)檢測。研究進(jìn)一步觀察了細(xì)胞因子b FGF和EGF單用及合用對克隆形成數(shù)量的影響及不同接種密度和白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)對細(xì)胞生長的影響。結(jié)果:神經(jīng)球nestin免疫熒光表達(dá)顯示強(qiáng)陽性;Brdu摻入實驗顯示神經(jīng)球細(xì)胞具有很好的增殖能力;分化后免疫雙標(biāo)結(jié)果得到了GFAP(68.32±5.70)%和β-Ⅲ-tublin(21.65±3.40)%的陽性表達(dá);當(dāng)2種因子同時存在時細(xì)胞克隆數(shù)量優(yōu)于單因子作用組(P㩳0.05,與EGF組比較;P0.01,與b FGF組比較);與對照組比較LIF作用組細(xì)胞數(shù)量明顯增多(F=2 630.114,P=0.000);細(xì)胞接種密度對神經(jīng)球的數(shù)量有明顯影響(F=155.100,P=0.001),在(0.5~16.0)×105個/ml密度范圍內(nèi),神經(jīng)球數(shù)量隨著接種密度增加而增加。結(jié)論:b FGF和EGF 2種細(xì)胞因子對NSCs的生長是必須的;長期傳代過程中LIF能促進(jìn)NSCs的生長;NSCs生長有密度依賴性,但接種密度應(yīng)該控制在適宜范圍內(nèi)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)干細(xì)胞與組織工程研究所干細(xì)胞研究平臺;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 神經(jīng)干細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 分化 白血病抑制因子
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:31100985) 重慶市自然科學(xué)基金資助項目(編號:cstc2010BB5096)
【分類號】：R321
【正文快照】： 研究證實,在胚胎腦和成年腦內(nèi)均存在具有自我更新能力和多項分化潛能的神經(jīng)干細(xì)胞(neuralstem cells,NSCs)[1],能分化產(chǎn)生神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。胚胎期的一部分神經(jīng)干細(xì)胞以非增殖的靜態(tài)方式長期存在于神經(jīng)系統(tǒng)中。神經(jīng)干細(xì)胞的體外獲取可通過直接從神經(jīng)組織分離培養(yǎng)、其他來

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉暌,王忠誠,張亞卓;神經(jīng)干細(xì)胞研究現(xiàn)狀及應(yīng)用展望[J];中華神經(jīng)外科雜志;2000年06期

2 劉輝,楊樹源;神經(jīng)干細(xì)胞及其臨床應(yīng)用前景[J];國外醫(yī)學(xué).神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊;2000年01期

3 劉泉開;神經(jīng)干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代診斷與治療;2000年05期

4 張世馥,田竟生;神經(jīng)干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];中國基礎(chǔ)科學(xué);2000年10期

5 汪璇,張浣清,朱艷霓,沈麗,李凌松;神經(jīng)干細(xì)胞研究新進(jìn)展及臨床應(yīng)用展望[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2001年06期

6 李勁濤,馮忠堂,王廷華;成年腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2001年04期

7 徐迎勝,樊東升;神經(jīng)干細(xì)胞及其臨床應(yīng)用前景[J];神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生;2002年01期

8 張宏,王瑋;神經(jīng)干細(xì)胞分化研究進(jìn)展[J];中國局解手術(shù)學(xué)雜志;2002年04期

9 鄭學(xué)勝,朱曉峰;抗體封閉膜受體方法在神經(jīng)干細(xì)胞研究中的應(yīng)用[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2002年05期

10 姜曉丹,徐如祥,柯以銓,楊志林,張世忠;神經(jīng)干細(xì)胞分化調(diào)節(jié)機(jī)制[J];中國臨床神經(jīng)科學(xué);2002年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 魏勇;應(yīng)大君;張偉;董世武;;幼齡家豬腦SVZ神經(jīng)干細(xì)胞的分離與鑒定[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

2 李力;萬琪;;小鼠神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)及缺血神經(jīng)元對其增殖、分化的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

3 李力;萬琪;劉永紅;張巍;;小鼠神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)及缺血神經(jīng)元對其增殖、分化的影響[A];科技、工程與經(jīng)濟(jì)社會協(xié)調(diào)發(fā)展——中國科協(xié)第五屆青年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2004年

4 黃兵;司銀楚;;成年動物腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞的分化調(diào)控機(jī)制[A];全國中醫(yī)藥科研與教學(xué)改革研討會論文集[C];2004年

5 吳承遠(yuǎn);朱樹干;;加強(qiáng)神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)移植治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會首屆全國代表大會論文匯編[C];2005年

6 楊小鋒;鄭學(xué)勝;劉偉國;馮軍峰;胡未偉;李谷;羅鳴;陳向日;;神經(jīng)干細(xì)胞團(tuán)的懸浮不穩(wěn)定性及其解決方法[A];2005年浙江省神經(jīng)外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

7 于龍剛;李娜;姜彥;解鳳陽;張曉雯;;貓胚胎源性神經(jīng)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定的研究[A];全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

8 夏立廣;李仲榮;劉淼清;王永飚;朱利斌;趙一鳴;;兩種不同來源神經(jīng)干細(xì)胞的神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)研究[A];2013年浙江省醫(yī)學(xué)會小兒外科學(xué)學(xué)術(shù)年會暨分會成立30周年慶典論文匯編[C];2013年

9 李文濤;;中醫(yī)藥對神經(jīng)干細(xì)胞增分化作用的研究現(xiàn)狀[A];2010中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會摘要集[C];2010年

10 徐富翠;梅欣明;楊曉紅;;神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)影響因素探討[A];中國解剖學(xué)會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;我國科學(xué)家成功地在體外培養(yǎng)出神經(jīng)干細(xì)胞[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2001年

2 沈麗 付鈺;神奇的神經(jīng)干細(xì)胞[N];科技日報;2002年

3 時仲省 高思敏 劉春陽;河南醫(yī)大成功培養(yǎng)人胚神經(jīng)干細(xì)胞[N];中國醫(yī)藥報;2001年

4 梓華;神經(jīng)干細(xì)胞可治惡性腦癌[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2002年

5 胡德榮;“抑制蛋白”可控制神經(jīng)干細(xì)胞提前分化[N];健康報;2007年

6 許琦敏;腦損傷修復(fù)治療又有新希望[N];文匯報;2007年

7 北京市神經(jīng)外科研究所 北京天壇醫(yī)院 王忠誠邋院士;神經(jīng)修復(fù)的生力軍——神經(jīng)干細(xì)胞[N];健康報;2008年

8 孫國根;神經(jīng)干細(xì)胞并非“全能制造者”[N];中國醫(yī)藥報;2009年

9 孫國根　白毅;靈長類腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報;2011年

10 特約記者 風(fēng)云;我國科學(xué)家成功培養(yǎng)出體外神經(jīng)干細(xì)胞[N];北京科技報;2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭立云;獼猴胚胎源性神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)、腦內(nèi)移植及其在青光眼玻璃體內(nèi)的轉(zhuǎn)歸—探索性研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

2 任永娟;材料調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞的研究[D];清華大學(xué);2009年

3 曹翠麗;大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及向神經(jīng)元的誘導(dǎo)分化[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

4 周虎田;骨髓源神經(jīng)干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

5 段發(fā)亮;神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)、增殖、遷移和分化的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 許漢鵬;中樞神經(jīng)系統(tǒng)多潛能神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的建立及其細(xì)胞學(xué)特性的初步研究和體內(nèi)移植實驗[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

7 高劍峰;海馬神經(jīng)干細(xì)胞增生分化及影響因素[D];鄭州大學(xué);2010年

8 高峰;小鼠神經(jīng)干細(xì)胞免疫原性的研究[D];浙江大學(xué);2010年

9 張殿君;胰島素樣生長因子-1對脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞分化調(diào)控的實驗研究[D];吉林大學(xué);2009年

10 盧洪流;成年大鼠腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞的在體研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2001年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王軒;細(xì)胞外鉀離子對體外培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞凋亡和分化的影響及其機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

2 呂艷玲;胚胎大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞的擴(kuò)增及其與三維微小凹圖式復(fù)合的研究[D];重慶大學(xué);2010年

3 汪立平;新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化的研究[D];蘇州大學(xué);2004年

4 武孔彥;神經(jīng)干細(xì)胞紋狀體內(nèi)移植后的行為和功能研究[D];華東師范大學(xué);2006年

5 戴明舒;神經(jīng)干細(xì)胞代謝參數(shù)的測定及其模型研究[D];大連理工大學(xué);2006年

6 游曉青;神經(jīng)干細(xì)胞體外增殖與分化的部分影響因子探討[D];福建醫(yī)科大學(xué);2003年

7 吳蕾;雌激素對大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的影響及其作用機(jī)制[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2003年

8 高安慧;去甲腎上腺素對胎鼠室下帶神經(jīng)干細(xì)胞的作用研究[D];華東師范大學(xué);2004年

9 程卓;氧化應(yīng)激誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞自噬發(fā)生的實驗研究[D];吉林大學(xué);2012年

10 樊明超;人胚胎紋狀體來源神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)生物學(xué)特性[D];青島大學(xué);2010年

，

本文編號：769338