本文關(guān)鍵詞：兩種G20株CA16病毒顆粒的生物學(xué)特性的分析

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【摘要】：柯薩奇病毒A組16型(CA16)是為小RNA病毒科腸道病毒屬成員,同時(shí)也是手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)的主要病原體之一。近年來手足口病在亞洲環(huán)太平洋地區(qū)出現(xiàn)的大規(guī)模頻繁爆發(fā),已經(jīng)成為亞太地區(qū)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生安全難題。針對同為手足口病病原的EV71病毒的滅活疫苗已經(jīng)進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn),而EV71滅活疫苗的實(shí)驗(yàn)研究表明對CA16病毒引起的感染交叉保護(hù)力低,為了擴(kuò)大對手足口病的保護(hù)率,開發(fā)CA16的疫苗勢在必行。 在CA16疫苗開發(fā)的過程中,通過用蔗糖密度梯度離心后會分離得到的兩種不同的CA16病毒顆粒：一種是沉降系數(shù)低,缺陷型的空殼病毒顆粒P病毒顆粒,一種是沉降系數(shù)高,天然成熟的實(shí)心顆粒R病毒顆粒。本實(shí)驗(yàn)針對CA16這兩種病毒顆粒的致病能力及免疫學(xué)特性做了相應(yīng)的研究分析,分析兩者間潛在的差異。本實(shí)驗(yàn)利用6%～54%的碘克沙醇(idoxanol)連續(xù)密度梯度離心,分離用PEG濃縮沉淀后的CA16病毒,將離心后得到的PR兩組病毒顆粒成分進(jìn)行相關(guān)的生化檢測和免疫評價(jià)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),電鏡下兩組病毒顆粒均含有缺陷型空心顆粒和天然實(shí)心顆粒,但R病毒顆粒成分中成熟顆粒要比P病毒顆粒成分中的多,同時(shí)R病毒顆粒的感染性滴度較高,通過qRT-PCR檢測,R病毒顆粒的RNA含量也比P病毒顆粒高。用ELISA檢測二者抗原含量,R病毒顆粒的抗原量卻低于P病毒抗原含量。SDS-PAGE膠檢測發(fā)現(xiàn)R病毒顆粒者含有VP1、VP2、VP3、VP4病毒蛋白條帶,具有成熟病毒顆粒的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu),而P病毒顆粒則含有VP0、VP1、VP3的蛋白結(jié)構(gòu),二者在病毒結(jié)構(gòu)上有較明顯區(qū)別。 將兩組病毒顆粒以104CCID50/只對新生乳鼠進(jìn)行顱內(nèi)注射,發(fā)現(xiàn)7日內(nèi)均能使乳鼠死亡,病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)二者都出現(xiàn)不同程度的病理現(xiàn)象。而二者以相同抗原含量對小鼠進(jìn)行肌肉免疫,免疫后的小鼠血清中能產(chǎn)生較高效價(jià)的中和抗體,但R病毒顆粒產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)要比P病毒顆粒的高,二者存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異。免疫56天后進(jìn)行的母體被動(dòng)保護(hù)實(shí)驗(yàn)也顯示二者能有效激起宿主的免疫反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示二者的免疫原性的有效性是值得肯定的,作為活病毒成分,P病毒顆粒抗原含量遠(yuǎn)比R病毒含量高, P能引起宿主機(jī)體的免疫反應(yīng)的特點(diǎn)提示我們在制備疫苗的技術(shù)過程中,通過控制滅活條件,可以使P病毒顆粒成分成為CVA16(?)勺滅活疫苗額外的備選抗原。
【關(guān)鍵詞】：CA16純化 P-病毒顆粒 R-病毒顆粒 中和效價(jià)
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 引言7-15
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法15-29
• (一) 實(shí)驗(yàn)材料15-17
• (二) 實(shí)驗(yàn)方法17-29
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析29-40
• (一) 病毒濃縮與純化29
• (二) 電鏡結(jié)果29-30
• (三) SDS-PAGE電泳、Western Blot結(jié)果30-32
• (四) 病毒ELISA抗原檢測與滴度測定32-34
• (五) 實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果34
• (六) P和R病毒顆粒成分的致病性34-36
• (七) 中和抗體效價(jià)36-37
• (八) 母體保護(hù)實(shí)驗(yàn)37-38
• (九) 乳鼠病理變化38-40
• 三、討論40-44
• 四、小結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 文獻(xiàn)綜述51-64
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 附錄64-68
• 附錄一 主要縮略詞表64-65
• 附錄二 主要溶液的配制65-68
• 致謝68-69
• 研究生簡歷69-70

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：763624