本文關(guān)鍵詞：重組人神經(jīng)生長(zhǎng)因子rh-β-NGF真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在HEK293細(xì)胞中的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 重組 神經(jīng)生長(zhǎng)因子 真核載體 HEK細(xì)胞 活性鑒定

【摘要】：為大量制備β-NGF,構(gòu)建了一種穩(wěn)定、高效表達(dá)重組人神經(jīng)生長(zhǎng)因子(Recombinant human nerve growth factor,rh-β-NGF)的真核表達(dá)載體及含該重組載體的HEK293細(xì)胞株。首先,構(gòu)建重組質(zhì)粒p CMV-β-NGF-IRES-dhfr并轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞系,用MTX加壓篩選和有限稀釋法進(jìn)行選擇,獲得高效表達(dá)rh-β-NGF的單克隆重組細(xì)胞株;隨后逐步降低血清培養(yǎng),最終使細(xì)胞株完全適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基并穩(wěn)定表達(dá)rh-β-NGF;SDS-PAGE分析該表達(dá)產(chǎn)物,可見(jiàn)相對(duì)分子質(zhì)量約13 k Da的條帶,純度大于50%,經(jīng)質(zhì)譜法測(cè)定得到其肽圖譜與理論序列完全匹配,接著利用離子交換層析和分子篩層析純化rh-β-NGF;最后進(jìn)行重組細(xì)胞株表達(dá)效率和表達(dá)穩(wěn)定性檢測(cè),表明重組細(xì)胞株可穩(wěn)定、高效表達(dá)rh-β-NGF,其分泌效率大于20 pg/(cell?d),并能誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的分化,具有良好的生物學(xué)活性。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部病理教研室;深圳市港科深研生物科技有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 重組 神經(jīng)生長(zhǎng)因子 真核載體 HEK細(xì)胞 活性鑒定
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(Nos.81101711,81101752) 重大新藥創(chuàng)制科技重大專(zhuān)項(xiàng)(No.2009ZX09102-226)資助~~
【分類(lèi)號(hào)】：R3416;Q78
【正文快照】： 神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子中最早被發(fā)現(xiàn)、目前研究最為透徹的一種神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子,具有神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)和促突起生長(zhǎng)雙重生物學(xué)功能,它對(duì)中樞及周?chē)窠?jīng)元的發(fā)育、分化、生長(zhǎng)、再生和功能特性的表達(dá)均具有重要的調(diào)控作用[1]。關(guān)于NGF,已有很多的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用,旨

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 沈正善,徐晉,劉軍,曹曉建,呂天潤(rùn);神經(jīng)生長(zhǎng)因子的提取和鑒定(英文)[J];Journal of Nanjing Medical University;2004年06期

2 陳文華;張映;;免疫組織化學(xué)技術(shù)在神經(jīng)生長(zhǎng)因子研究中的應(yīng)用[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2006年11期

3 王立根;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子的研究現(xiàn)狀[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;1990年02期

4 柳川;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子研究的啟迪[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué);1990年02期

5 趙云生;肖振民;李東亮;姬尚生;;2.5S神經(jīng)生長(zhǎng)因子的提取純化[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1991年03期

6 王澤洪,高汝龍;神經(jīng)生長(zhǎng)因子在眼科學(xué)中的應(yīng)用展望[J];自然雜志;1997年04期

7 雷正旺,洪光祥,王發(fā)斌;外源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)內(nèi)源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子的影響[J];中華手外科雜志;1997年01期

8 翟雷,卜曉萍,潘萍,沈心亮;神經(jīng)生長(zhǎng)因子生物活性檢定方法的建立[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1999年01期

9 劉少平,楊國(guó)成,孟祥平,夏臘菊,朱漢民;小鼠頜下腺2.5S神經(jīng)生長(zhǎng)因子生物活性評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)的建立[J];廣西醫(yī)學(xué);2005年01期

10 李媛;邵金貴;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子與腦的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2008年22期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 葉英;曲媛;李靜;向蘭;戚建華;;麥冬來(lái)源的擬神經(jīng)生長(zhǎng)因子活性物質(zhì)的化學(xué)及生物學(xué)研究[A];2012長(zhǎng)三角藥物化學(xué)研討會(huì)論文集[C];2012年

2 劉宇鵬;趙德偉;崔旭;王衛(wèi)明;孫強(qiáng);;神經(jīng)生長(zhǎng)因子在大鼠骨折部位的表達(dá)[A];2009年全國(guó)骨與關(guān)節(jié)損傷新技術(shù)研討會(huì)暨第六屆股骨頭缺血性壞死修復(fù)與再造學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

3 高胭;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子治療新生兒缺氧缺血性腦病臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三次全國(guó)兒科基層醫(yī)師學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

4 史鶯歌;;健康教育對(duì)肌注鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子患者焦慮的影響[A];2013年河南省中風(fēng)康復(fù)護(hù)理新業(yè)務(wù)、新技術(shù)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2013年

5 史鶯歌;;健康教育對(duì)肌注鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子患者焦慮的影響[A];河南省外科創(chuàng)傷及災(zāi)難救治護(hù)理專(zhuān)科知識(shí)學(xué)術(shù)會(huì)議（神經(jīng)科學(xué)組）論文集[C];2011年

6 曾文;王平;張舒;;小鼠頜下腺2.5s神經(jīng)生長(zhǎng)因子的生物學(xué)活性研究[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第九屆制藥工業(yè)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2000年

7 曹宜生;謝姣娥;劉一平;王錫鋒;賓漫容;陳煥勇;;蛇毒神經(jīng)生長(zhǎng)因子臨床應(yīng)用效果觀察[A];創(chuàng)新藥物及新品種研究、開(kāi)發(fā)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

8 付江泉;王迪芬;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)原代鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[A];貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)重癥醫(yī)學(xué)分會(huì)第三屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

9 舒雨雁;;中華眼鏡蛇毒神經(jīng)生長(zhǎng)因子的研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

10 陳素蘭;姜志鋼;趙建剛;吳愛(ài)菊;徐蘭珍;郝靜;;人胚骨骼肌中促運(yùn)動(dòng)神經(jīng)生長(zhǎng)因子的分離及生物效應(yīng)分析[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 金山;鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子四平八穩(wěn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2014年

2 本報(bào)特約撰稿人 蔡德山;“神經(jīng)生長(zhǎng)因子”快速生長(zhǎng)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

3 記者 劉海英;神經(jīng)生長(zhǎng)因子有助修復(fù)受損心肌[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

4 記者 韓璐;“神經(jīng)生長(zhǎng)因子”獲國(guó)家一類(lèi)新藥證書(shū)[N];科技日?qǐng)?bào);2001年

5 唐亞強(qiáng) 陳杰;注射用神經(jīng)生長(zhǎng)因子首批產(chǎn)品問(wèn)世[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

6 楊希;注射用神經(jīng)生長(zhǎng)因子喜獲國(guó)家一類(lèi)新藥證書(shū)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

7 孫洪濤;世界首個(gè)神經(jīng)生長(zhǎng)因子產(chǎn)品獲國(guó)家批準(zhǔn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

8 通訊員衛(wèi)建國(guó);“火炬”照亮生命之光[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

9 本報(bào)記者何世文;治療神經(jīng)損傷有了新藥[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

10 傅繪;情緒好壞左右健康[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 鄒曉莉;神經(jīng)生長(zhǎng)因子和膠原蛋白的LIF-CE分析方法研究及應(yīng)用[D];四川大學(xué);2005年

2 郎明磊;siRNA在IL1β和IL6的作用下對(duì)椎間盤(pán)炎大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子的影響[D];山東大學(xué);2014年

3 曲媛;中藥來(lái)源的擬神經(jīng)生長(zhǎng)因子活性物質(zhì)的化學(xué)及生物學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2012年

4 胡和生;心肌梗死后神經(jīng)生長(zhǎng)因子RNA干擾的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2014年

5 舒紅;人β-神經(jīng)生長(zhǎng)因子前體基因的克隆及在Pichia pastoris酵母中的表達(dá)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2003年

6 王妍;重組人神經(jīng)生長(zhǎng)因子的克隆、表達(dá)、純化、性質(zhì)和其應(yīng)用的研究[D];吉林大學(xué);2006年

7 靳英麗;神經(jīng)生長(zhǎng)因子在支氣管哮喘發(fā)病中的作用研究[D];吉林大學(xué);2008年

8 侯劍峰;低能激光照射提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心肌梗死療效的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張沛;神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)損傷后修復(fù)及結(jié)構(gòu)重建的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2012年

2 王梨明;鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子鞘膜內(nèi)注射對(duì)周?chē)窠?jīng)吻合后修復(fù)與再生的研究[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2012年

3 張躍齡;蛇毒神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2009年

4 張素;廣西產(chǎn)圓斑蝰蛇蛇毒神經(jīng)生長(zhǎng)因子的分離純化、鑒定及神經(jīng)生物學(xué)活性[D];福建醫(yī)科大學(xué);2003年

5 杜秀娟;蛇毒神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)混合培養(yǎng)鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

6 鄧秋瓊;蛇毒神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2006年

7 張春燕;神經(jīng)生長(zhǎng)因子偶聯(lián)物對(duì)老年性癡呆動(dòng)物模型的作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2000年

8 李榮;注射用鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子生物學(xué)活性檢測(cè)方法的研究[D];湖北大學(xué);2014年

9 丁雨;鼓室注射鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子治療頑固性耳鳴的療效觀察[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2014年

10 蔡鵬;構(gòu)建神經(jīng)生長(zhǎng)因子基因修飾的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：762057