本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌抗毒素higA的原核表達(dá)及多克隆抗體制備

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【摘要】：目的克隆編碼結(jié)核分枝桿菌抗毒素基因hig A并在大腸桿菌中表達(dá),純化hig A蛋白后,制備兔抗hig A的多克隆抗體。方法利用PCR法從結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組擴(kuò)增hig A基因;構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-32a(+)-hig A;篩選出陽(yáng)性重組質(zhì)粒后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,異丙基硫代-β-D-半乳糖苷誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá);利用SDS-PAGE與Western blot法鑒定目的蛋白的表達(dá);以純化的hig A蛋白免疫新西蘭大白兔,制備抗hig A的多克隆抗體并進(jìn)行效價(jià)及特異性鑒定。結(jié)果成功擴(kuò)增出了hig A基因,克隆于載體p ET-32a(+)質(zhì)粒中,PCR篩選和酶切鑒定獲得陽(yáng)性克隆,測(cè)序證實(shí)正確;轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21后能成功誘導(dǎo)hig A蛋白[相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)36 630]的表達(dá);利用純化的hig A蛋白免疫新西蘭大白兔后,能有效地刺激特異性hig A抗體的產(chǎn)生,抗體的效價(jià)達(dá)到1∶3200以上。結(jié)論成功在大腸桿菌中表達(dá)出hig A蛋白,并制備出效價(jià)及特異性良好的兔抗hig A多克隆抗體。
【作者單位】： 濰坊醫(yī)學(xué)院臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教研室;濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科山東省臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;濰坊醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;菏澤市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;中國(guó)人民解放軍第401醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 毒素抗毒素系統(tǒng) higA 多克隆抗體
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30972639,81170080)
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 毒素抗毒素系統(tǒng)(toxin-antitoxin system,TAS)最早發(fā)現(xiàn)于大腸桿菌的質(zhì)粒中,可通過(guò)分裂后致死效應(yīng)來(lái)維持質(zhì)粒在大腸桿菌中的穩(wěn)定存在。有學(xué)者認(rèn)為T(mén)AS可發(fā)揮誘導(dǎo)細(xì)菌程序性細(xì)胞死亡(bacterialprogrammed cell death,BPCD)、誘導(dǎo)細(xì)菌的可逆性休眠、應(yīng)激條件下介導(dǎo)持留菌形成、調(diào)

【參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：747910