本文關鍵詞：結核分枝桿菌抗毒素higA的原核表達及多克隆抗體制備

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【摘要】：目的克隆編碼結核分枝桿菌抗毒素基因hig A并在大腸桿菌中表達,純化hig A蛋白后,制備兔抗hig A的多克隆抗體。方法利用PCR法從結核分枝桿菌H37Rv基因組擴增hig A基因;構建重組表達質粒p ET-32a(+)-hig A;篩選出陽性重組質粒后,轉化大腸桿菌BL21,異丙基硫代-β-D-半乳糖苷誘導目的蛋白表達;利用SDS-PAGE與Western blot法鑒定目的蛋白的表達;以純化的hig A蛋白免疫新西蘭大白兔,制備抗hig A的多克隆抗體并進行效價及特異性鑒定。結果成功擴增出了hig A基因,克隆于載體p ET-32a(+)質粒中,PCR篩選和酶切鑒定獲得陽性克隆,測序證實正確;轉化大腸桿菌BL21后能成功誘導hig A蛋白[相對分子質量(Mr)36 630]的表達;利用純化的hig A蛋白免疫新西蘭大白兔后,能有效地刺激特異性hig A抗體的產生,抗體的效價達到1∶3200以上。結論成功在大腸桿菌中表達出hig A蛋白,并制備出效價及特異性良好的兔抗hig A多克隆抗體。
【作者單位】： 濰坊醫(yī)學院臨床檢驗診斷學教研室;濰坊醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科山東省臨床檢驗診斷學高校重點實驗室;濰坊醫(yī)學院基礎醫(yī)學院病原生物學教研室;菏澤市第三人民醫(yī)院檢驗科;中國人民解放軍第401醫(yī)院檢驗科;
【關鍵詞】： 結核分枝桿菌 毒素抗毒素系統(tǒng) higA 多克隆抗體
【基金】：國家自然科學基金(30972639,81170080)
【分類號】：R392
【正文快照】： 毒素抗毒素系統(tǒng)(toxin-antitoxin system,TAS)最早發(fā)現(xiàn)于大腸桿菌的質粒中,可通過分裂后致死效應來維持質粒在大腸桿菌中的穩(wěn)定存在。有學者認為TAS可發(fā)揮誘導細菌程序性細胞死亡(bacterialprogrammed cell death,BPCD)、誘導細菌的可逆性休眠、應激條件下介導持留菌形成、調

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本文編號：747910