本文關(guān)鍵詞：基于報(bào)告基因的抗CD20單克隆抗體ADCC生物學(xué)活性測(cè)定方法的建立

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【摘要】：利用Jurkat/NFAT-luc+FcγRIIIa轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系作為效應(yīng)細(xì)胞,WIL2-S細(xì)胞系作為靶細(xì)胞,通過(guò)熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)(Bio GloTM Luciferase Assay System)進(jìn)行抗CD20單抗的ADCC生物學(xué)活性檢測(cè),并對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化及方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果顯示抗CD20單抗在該方法中存在量效關(guān)系,且符合四參數(shù)方程式:y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D。方法經(jīng)優(yōu)化確定靶細(xì)胞為WIL2-S細(xì)胞,抗體稀釋濃度為18 000 ng·m L-1,1∶5倍的稀釋倍數(shù),效靶比為6∶1,誘導(dǎo)時(shí)間為6 h。該方法具有良好的專(zhuān)屬性,8次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的回歸分析、線(xiàn)性及平行性均通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn);4個(gè)不同稀釋組回收率樣本經(jīng)3次測(cè)定,相對(duì)效價(jià)分別為(44.39±3.93)%、(72.74±2.78)%、(128.28±7.01)%和(168.19±2.70)%,變異系數(shù)均小于10%,對(duì)應(yīng)回收率分別為(88.78±7.85)%、(96.99±3.70)%、(102.63±5.61)%和(112.12±1.80)%。本研究利用轉(zhuǎn)基因細(xì)胞法成功建立抗CD20單抗ADCC生物學(xué)活性檢測(cè)方法,該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、重復(fù)性好,準(zhǔn)確性高,可作為抗CD20單抗ADCC生物學(xué)活性的常規(guī)檢測(cè)方法。
【作者單位】： 中國(guó)食品藥品檢定研究院;
【關(guān)鍵詞】： 抗CD單克隆抗體 ADCC 生物學(xué)活性
【基金】：國(guó)家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專(zhuān)項(xiàng)資助項(xiàng)目(2014ZX09304311-001,2012ZX09304010) 中國(guó)食品藥品檢定研究院中青年發(fā)展研究基金資助項(xiàng)目(2012B6)
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： (National Institutes for Food and Drug Control,Beijing 100050,China)1為本文的共同第一作者.CD20抗原是分子量為35 k D的非糖基化跨膜蛋白,CD20作為B細(xì)胞表面特有的分化抗原,在95%以上的B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞膜上高密度表達(dá),而在造血干細(xì)胞、血漿細(xì)胞和其他正常組織中不表達(dá),

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本文編號(hào)：730002