本文關(guān)鍵詞：Tet-on慢病毒系統(tǒng)表達弓形蟲ROP18的研究

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【摘要】：目的用Tet-on慢病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建穩(wěn)定表達弓形蟲棒狀體蛋白18(ROP18)的293T細胞株。方法PCR擴增ROP18基因序列插入慢病毒載體p LVCT-t TR-KRAB中,構(gòu)建帶有ROP18活性片段的慢病毒載體p LVCT-t TRKRAB-ROP18。經(jīng)鑒定后將該重組載體(6μg)與輔助質(zhì)粒ps PAX2(4μg)和p MD2.G(2μg)共同轉(zhuǎn)染293T細胞,熒光顯微鏡下觀察細胞熒光。于轉(zhuǎn)染后48和72 h收集含有慢病毒顆粒上清液,感染293T細胞。以1μg/ml強力霉素(DOX)誘導293T細胞表達ROP18,熒光顯微鏡下觀察細胞熒光,RT-PCR法檢測293T細胞中的ROP18表達情況。結(jié)果 PCR擴增rop18片段為960 bp,與預(yù)期大小一致。經(jīng)PCR和酶切鑒定重組慢病素載體構(gòu)建成功。轉(zhuǎn)染48 h后,293T細胞于熒光顯微鏡下可見綠色熒光。經(jīng)DOX誘導24 h即可觀察到293T細胞中明亮綠色熒光。RT-PCR檢測結(jié)果顯示,293T細胞ROP18可產(chǎn)生960 bp特異條帶,與預(yù)期結(jié)果一致。結(jié)論采用Tet-on慢病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建了穩(wěn)定表達弓形蟲ROP18的293T細胞株。
【作者單位】： 江蘇大學醫(yī)學院;中國疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所 衛(wèi)生部寄生蟲病原與媒介生物學重點實驗室 世界衛(wèi)生組織瘧疾、血吸蟲病和絲蟲病合作中心;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲 棒狀體蛋白 慢病毒 四環(huán)素誘導調(diào)控表達系統(tǒng)
【基金】：國家自然科學青年基金(No.81301453) 衛(wèi)生部寄生蟲病原與媒介生物學重點實驗室開放課題(No.WSBKTKT201302) 中國博士后科學基金(No.2014M561598) 江蘇省博士后科研資助計劃(No.1402171C) 江蘇大學高級人才啟動基金(No.13JDG023,13JDG127)~~
【分類號】：R382.5
【正文快照】： (1 School of Medicine,Jiangsu University,Zhenjiang 212013,China;2 National Institute of ParasiticDiseases,Chinese Center for Disease Control and Prevention;Key Laboratory of Parasite and Vector Biology,MOH;WHO Collaborating Centre for Malaria,Schistosomi

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 王淑艷;張愚;;慢病毒載體的設(shè)計及應(yīng)用進展[J];中國生物工程雜志;2006年11期

2 吳亮;章秋霞;李婷婷;陳盛霞;曹建平;;人包皮成纖維細胞和人子宮頸癌細胞體外培養(yǎng)弓形蟲速殖子[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2009年03期

3 吳亮;薛蘭蘭;王曉;吳臘梅;姜旭淦;陳盛霞;;用四環(huán)素誘導調(diào)控表達系統(tǒng)構(gòu)建弓形蟲脂肪酸合成酶FABZ缺陷株[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2014年04期

4 都建;安然;程里;陳瀅;沈繼龍;;酵母雙雜交篩選與弓形蟲毒力因子ROP18相互作用的宿主蛋白[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2013年01期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 耿海濤;肖乾;徐鄧勇;胡立鋒;丁克峰;;HNF6重組慢病毒載體的構(gòu)建及對大腸癌SW620細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響[J];南方醫(yī)科大學學報;2012年01期

2 李偉;高玲;;慢病毒載體在眼科基因治療的應(yīng)用[J];國際眼科雜志;2008年09期

3 劉洋博;何剛;章波;龐學利;;慢病毒介導shRNA沉默HDAC1表達對EC109細胞生長特性的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2013年10期

4 潘志敏;馬勇;程細高;;常用病毒載體的基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用[J];中國生化藥物雜志;2011年05期

5 韓騰龍;王立峰;張t，

本文編號：729523