本文關(guān)鍵詞：CD11c單抗修飾載OVA免疫脂質(zhì)體的制備及其對樹突狀細胞作用的研究

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【摘要】：樹突狀細胞(Dendritic cells, DCs)是體內(nèi)功能最強的專職抗原提呈細胞,在免疫系統(tǒng)對抗原的捕獲、處理及提呈過程中居于中心地位,它能同時激發(fā)初始性和獲得性免疫應(yīng)答,由于其在機體的抗感染免疫及抗腫瘤免疫應(yīng)答中的作用極其重要而成為近年來免疫學研究的熱點。而CDllc是確定的DCs特異表面標志之一,在未成熟DCs(iDCs)和成熟DCs (mDCs)中均有較高的表達。大量研究也證實CDllc可作為有效的靶標,介導抗原的內(nèi)吞,促進DCs特異性免疫應(yīng)答。 脂質(zhì)體作為藥物載體,主要由磷脂構(gòu)成,具有類細胞膜結(jié)構(gòu),易與細胞磷脂雙分子層相融合。它擁有載藥量大、保護被包封藥物免遭降解,緩釋、減少用藥劑量等優(yōu)點,能夠提高藥物的治療指數(shù),改變包封藥物的體內(nèi)分布,在許多疾病治療中顯示出了明顯的優(yōu)越性,因此我們選取脂質(zhì)體(liposomes)作為載藥載體。為了克服脂質(zhì)體同時存在的轉(zhuǎn)染效率低、靶向性差等缺點,因此我們構(gòu)建了以DCs表面分子CDllc為靶標的包裹模型抗原卵清白蛋白(ovalbumin, OVA)的免疫脂質(zhì)體(immunoliposomes modified by CD11c mAb parcel of OVA, CD11c-OVA-imliposomes),通過在包裹OVA的脂質(zhì)體表面共價鍵結(jié)合特異性針對CDllc單克隆抗體的方法,利用單克隆抗體與CDllc分子的特異性結(jié)合,提高包裹OVA脂質(zhì)體對DCs的特異靶向性和親和能力,達到提高轉(zhuǎn)染效率,介導抗原的內(nèi)吞,促進包裹抗原特異性免疫應(yīng)答的作用。為使單克隆抗體與脂質(zhì)體有效結(jié)合并更好的保持單抗的生物活性,我們采用將馬來酰亞胺-甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酰甘油磷脂酰乙醇胺(Mal-PEG2000-DSPE)嵌入到脂質(zhì)體材料中,通過巰基化試劑2-亞氨基硫烷鹽酸鹽(2-IT)處理CD11c單克隆抗體,使單抗末端發(fā)生巰基化,然后再通過馬來酰亞胺基團和巰基化的CDllc單抗在溫和的條件下產(chǎn)生有效連接。 在完成CD11c-OVA-imliposomes構(gòu)建和制備的基礎(chǔ)上,本文對其粒徑、Zeta電位、包封率和CDllc單抗的連接效率等藥劑學指標進行了全面的考察和評價。采用電子透射電鏡(TEM)和納米粒徑測定儀(DLS)對OVA-liposomes和CD11c-OVA-imliposomes的粒徑、Zeta電位、表面形態(tài)等性質(zhì)進行表征,結(jié)果顯示脂質(zhì)體表面光滑、多為圓形、少許橢圓形,無粘連,粒徑分布均勻,平均粒徑在145-160nm范圍,與OVA-liposomes相比較,CD11c-OVA-imliposomes的粒徑增大(146nm→159nm), OVA-liposomes Zeta電位為(-33.6±1.1) mv, CD11c-OVA-imliposomes Zeta電位為(-31.2±1.7)mv,粒徑和電位的變化可能由CD11c單抗連接于脂質(zhì)體表面所引起；采用高效液相色譜法測定OVA-liposomes包封率為(32.5±1.9)%CD11c-OVA-imliposomes表面CDllc單抗活性良好,且連接效率為(77.6±3.2)%。 我們采用流式細胞儀(FCM)定量、激光共聚焦顯微鏡(LSCM)定性檢測的方法對CD11c-OVA-imliposomes在體外特異性DCs靶向能力進行的測定,結(jié)果表明,CD11c-OVA-imliposomes具有對DCs特異性的靶向作用。我們還通過流式細胞儀檢測了OVA-liposomes和CD11c-OVA-imliposomes的刺激對DCs表面表達I-Ab、CD40、CD80、 CD86等表型成熟相關(guān)因子的影響,發(fā)現(xiàn)二者與DCs作用后對I-Ab、CD40、CD80、CD86等表面分子的表達均有不同程度的促進作用,其中CD11c-OVA-imliposomes較OVA-liposomes促進程度更高,表明CD11c-OVA-imliposomes可以更有效的促進DCs的表型成熟,促進其更好的發(fā)揮抗原提呈功能。 本研究成功的制備了有效包裹OVA蛋白可特異性靶向DCs的免疫脂質(zhì)體CD11c-OVA-imliposomes,并對其性能進行了表征,證明了CD11c-OVA-imliposomes對DCs的特異靶向性,并發(fā)現(xiàn)該特異性靶向的免疫脂質(zhì)體可有效促進DCs細胞表面I-Ab、CD40、CD80、CD86等成熟相關(guān)表面分子的表達,促進DCs的表型成熟。
【關(guān)鍵詞】：CD11c 免疫脂質(zhì)體 樹突狀細胞 OVA 靶向性
【學位授予單位】：河北北方學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮寫10-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-18
• 結(jié)果18-21
• 附圖21-28
• 附表28-30
• 討論30-32
• 結(jié)論32-34
• 參考文獻34-40
• 綜述40-48
• 參考文獻45-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

【參考文獻】

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1 徐曼;徐光緒;王渝琦;戴明q，

本文編號：715167