本文關(guān)鍵詞：人關(guān)節(jié)液對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化影響的實驗研究

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【摘要】：目的體外獲得人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs),并對獲取的hBMSCs進(jìn)行純化、擴(kuò)增及鑒定。通過人關(guān)節(jié)液與hBMSCs混合培養(yǎng),研究共培養(yǎng)系統(tǒng)導(dǎo)致hBMSCs定向誘導(dǎo)分化的影響,探討關(guān)節(jié)液對hBMSCs的作用,為以關(guān)節(jié)液和BMSCs作為軟骨組織工程基質(zhì)的使用奠定一定的基礎(chǔ)。方法從因創(chuàng)傷導(dǎo)致不同部位的骨折需行骨折復(fù)位及髂骨植骨術(shù)的志愿者中,獲取骨髓,采用全骨髓、貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)和分離hBMSCs。在實驗過程中,我們還對培養(yǎng)的hBMSCs進(jìn)行了凍存和復(fù)蘇。實驗在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長形態(tài)；取生長狀態(tài)良好的P3代細(xì)胞進(jìn)行表面標(biāo)志物的表達(dá)和細(xì)胞表型的鑒定；取生長狀態(tài)良好的P1、P2、P3代細(xì)胞,分別用胰蛋白酶消化、培養(yǎng),以培養(yǎng)時間為橫軸,細(xì)胞數(shù)為縱軸,繪制hBMSCs生長曲線圖。在無菌操作下,患者取坐位,雙膝下垂,穿刺部位按常規(guī)進(jìn)行皮膚消毒,用2%利多卡因作局部麻醉,于健康志愿者的膝關(guān)節(jié)的髕骨下緣、髕韌帶外側(cè)1cm處,定位后用一次性10號注射針頭與脛骨平臺平行,向內(nèi)呈45度角,穿刺進(jìn)入,針頭完全刺入即可,抽取膝關(guān)節(jié)內(nèi)的關(guān)節(jié)液,將其與生長良好的P3細(xì)胞混合用于實驗,將24孔板盲法隨機(jī)分為3組(A組、B組及C組),每組8孔,每個孔板內(nèi)放置無菌并用多聚賴氨酸預(yù)處理過的爬片,其中：A組：單純關(guān)節(jié)液組(關(guān)節(jié)液+含體積分?jǐn)?shù)10%FBS+1%雙抗的HG-DMEM);B組：關(guān)節(jié)液+hBMSCs組(關(guān)節(jié)液+hBMSCs+含體積分?jǐn)?shù)10%FBS+1%雙抗的HG-DMEM);C組：單純hBMSCs組(hBMSCs+含體積分?jǐn)?shù)10%FBS+1%雙抗的HG-DMEM)。每’天在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化和生長情況,分別于誘導(dǎo)后第7,14,21天行甲苯胺藍(lán)染色檢測酸性糖胺多糖表達(dá),免疫組化染色檢測細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)。結(jié)果經(jīng)全骨髓、貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)分離獲得了純度較高h(yuǎn)BMSCs,細(xì)胞呈均一的長梭形、短梭形及多角形,漩渦狀或輻射狀結(jié)構(gòu),繪制的生長曲線呈S形。所分離培養(yǎng)的細(xì)胞表達(dá)CD29、CD44、CD90、CD105分別為：99.6%、100%、99.4%、92.5%,呈均一、高表達(dá)性；而表達(dá)CD34、 CD45分別為：0.5%、0.6%,呈低表達(dá)性。hBMSCs與關(guān)節(jié)液混合培養(yǎng)后,細(xì)胞增殖速度減慢,由長梭形變?yōu)槎嘟切�、橢圓形,細(xì)胞外基質(zhì)呈甲苯胺藍(lán)異染性陽性,Ⅱ型膠原免疫組化陽性,表現(xiàn)出向關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分化的特點。結(jié)論全骨髓、貼壁培養(yǎng)法可成功分離hBMSCs,該方法具有操作簡便、經(jīng)濟(jì)及污染少等優(yōu)點。該實驗結(jié)果提示,關(guān)節(jié)液對hBMSCs向軟骨細(xì)胞分化有正性促進(jìn)作用,關(guān)節(jié)液中可能含有促hBMSCs向軟骨細(xì)胞方向分化的物質(zhì),支持關(guān)節(jié)液作為軟骨組織工程基質(zhì)使用。
【關(guān)鍵詞】：關(guān)節(jié)液 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 軟骨細(xì)胞 軟骨組織工程共培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-8
• 前言8-10
• 材料與方法10-19
• 結(jié)果19-21
• 討論21-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 英漢縮略詞對照表32-33
• 附圖33-38
• 致謝38-39
• 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨損傷的研究進(jìn)展(綜述)39-51
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 攻讀學(xué)位期問發(fā)表的論文51-53
• 附件53-58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：703452