本文關(guān)鍵詞：臍血來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的分化潛能研究

  更多相關(guān)文章： 臍帶血 間充質(zhì)干細(xì)胞 分化 組織工程 缺損修復(fù) 優(yōu)化培養(yǎng)

【摘要】：目的：間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是具有多向分化潛能的成體干細(xì)胞,能朝著間充質(zhì)組織（mesenchymal tissues）分化，如骨組織、軟骨組織、脂肪組織等。近年來(lái)研究顯示臍血中存在間充質(zhì)干細(xì)胞(umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UCB-MSCs)，能朝著骨、脂肪、軟骨、心肌、神經(jīng)組織分化。由于其易獲取、具有多系分化潛能可以用來(lái)修復(fù)組織缺損，此外免疫原性低可以用來(lái)預(yù)防移植抗宿主病的發(fā)生。然而它們?cè)谀氀械臄?shù)量非常少，分離的成功率較低。在誘導(dǎo)分化方面，與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比臍血間充質(zhì)干細(xì)胞表現(xiàn)出來(lái)的分化結(jié)果在很多研究中不一致，需進(jìn)一步進(jìn)行研究證實(shí)。本課題旨在通過(guò)優(yōu)化培養(yǎng)條件，提高臍血間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)的成功率，對(duì)UCB-MSCs的脂肪分化潛能做進(jìn)一步的研究。 方法：1.提高臍血的總量，大于80ml，，密度梯度離心獲取單個(gè)核細(xì)胞，選擇最適培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)胎牛血清的濃度，進(jìn)行優(yōu)化培養(yǎng)，提高成功率。 2.對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行表面抗原的鑒定，對(duì)其表達(dá)的粘附分子進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)。 3.加入脂肪細(xì)胞分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基，進(jìn)行脂肪方向分化。結(jié)果：臍血間充質(zhì)干細(xì)胞在DMEM低糖培養(yǎng)基加上15%胎牛血清的培養(yǎng)基成原代培養(yǎng)成功率高，細(xì)胞表達(dá)CD29、CD44、CD59、CD90、CD73、CD105、CD166不表達(dá)或弱表達(dá)HLA-ABC、HLA-DR、CD13、CD14、CD31、CD106。CXCR4、SDF-1、CD54、CD49d的基因可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。UCB-MSCs在脂肪分化培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下形成空泡狀油紅O染色為紅色的脂肪細(xì)胞。 結(jié)論：通過(guò)Ficoll密度離心方法我們成功分離出單個(gè)核細(xì)胞，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察、免疫分型檢測(cè)、粘附分子基因表達(dá)等鑒定可以證實(shí)我們所培養(yǎng)的細(xì)胞是臍血間充質(zhì)干細(xì)胞，通過(guò)脂肪誘導(dǎo)分化結(jié)果證實(shí)了臍血間充質(zhì)干細(xì)胞可以朝著脂肪方向分化。
【關(guān)鍵詞】：臍帶血 間充質(zhì)干細(xì)胞 分化 組織工程 缺損修復(fù) 優(yōu)化培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-10
• 1. 研究方案10
• 2.材料與方法10-17
• 2.1 材料10-11
• 2.1.1 主要儀器10-11
• 2.1.2 主要試劑11
• 2.2 方法11-16
• 2.2.1 臍血的收集及臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的提取11
• 2.2.2 臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)11-12
• 2.2.3 臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原檢測(cè)12
• 2.2.4 粘附分子基因檢測(cè)12-13
• 2.2.5 總的 RNA 的抽取和處理13-16
• 2,2.5.1 總的 RNA 的抽取13-14
• 2.2.5.2 總的 RNA 的測(cè)定14
• 2.2.5.3. 總的 RNA 的處理14-15
• 2.2.5.4 RT-PCR15-16
• 2.2.5.5. PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)16
• 2.3 脂肪分化16-17
• 2.3.1 誘導(dǎo)條件和方法步驟16-17
• 2.3.2 脂肪誘導(dǎo)分化后油紅 O 染色17
• 3. 統(tǒng)計(jì)方法17
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-25
• 4.1 臍血間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)結(jié)果17-19
• 4.2 臍血間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞表面抗原流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果19-24
• 4.2.1 臍血間充質(zhì)干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞免疫分型的比較結(jié)果23-24
• 4.3 臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化結(jié)果24-25
• 5. 討論25-28
• 參考文獻(xiàn)28-32
• 附錄A32-33
• 附錄 B33-47
• 參考文獻(xiàn)40-47
• 致謝47

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 林放;王甜甜;王世春;孟強(qiáng);尹智平;陸華;蔣天倫;趙樹(shù)銘;;3種血小板生成的關(guān)鍵因子共轉(zhuǎn)染人骨髓基質(zhì)細(xì)胞的研究[J];中國(guó)輸血雜志;2012年03期

2 王琪;茍三懷;湯亭亭;劉巖;歐陽(yáng)躍平;席焱海;韓慶林;;臍血間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的改良及其生物學(xué)特性研究[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年01期

3 馬云勝;秦書(shū)儉;穆長(zhǎng)征;;人臍血CD44~+細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其分化潛能的初步鑒定[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年18期

4 朱亦X;喬振華;趙嘉慧;朱鐳;孫彥;李興;趙寶珍;;不同培養(yǎng)方法骨髓破骨細(xì)胞樣細(xì)胞分化及活性的實(shí)驗(yàn)觀察[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2006年05期

5 吳玉卓;陳紅;;臍血間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)成肝細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國(guó)肝臟病雜志(電子版);2008年02期

6 李陳;肖玉周;;不同來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性差異研究進(jìn)展[J];創(chuàng)傷外科雜志;2014年01期

7 田新;符仁義;陳艷;袁粒星;;臍帶組織間充質(zhì)干細(xì)胞分離及向成骨與脂肪細(xì)胞的分化[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年01期

8 張?jiān)坪?鄧廉夫;楊慶銘;;骨髓單核細(xì)胞和骨髓基質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合誘導(dǎo)破骨細(xì)胞樣細(xì)胞[J];老年醫(yī)學(xué)與保健;2006年03期

9 王元元;楊洋;高揚(yáng);楊亞?wèn)|;李國(guó)靈;魯元?jiǎng)?;如何在臨床學(xué)習(xí)中培養(yǎng)醫(yī)學(xué)生的美學(xué)修養(yǎng)[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2012年09期

10 CHEN YiHuan;TENG XiaoMei;CHEN WeiQian;YANG JunJie;YANG ZiYing;YU YunSheng;SHEN ZhenYa;;Timing of transplantation of autologous bone marrow derived mesenchymal stem cells for treating myocardial infarction[J];Science China(Life Sciences);2014年02期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李東杰;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)創(chuàng)面愈合及體外誘導(dǎo)分化為表皮樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

2 程穎;葛根素促進(jìn)小鼠胚胎干細(xì)胞源工作心肌細(xì)胞的分化及其調(diào)控機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2011年

3 楊大志;BMP-2/膠原/摻鍶羥基磷灰石成骨活性材料的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

4 朱亦X;PPARγ2轉(zhuǎn)錄因子與Ⅱ型原發(fā)性骨質(zhì)疏松關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2006年

5 孫愛(ài)紅;臍血源貼壁細(xì)胞生物學(xué)特性和單個(gè)核細(xì)胞骨髓腔內(nèi)移植NOD/SCID小鼠實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

6 陸德云;1.阿德福韋酯治療拉米夫定耐藥HBeAg（+）慢性乙肝的臨床研究 2.重型肝炎患者血漿對(duì)體外培養(yǎng)臍血間充質(zhì)干細(xì)胞影響的初步研究[D];四川大學(xué);2006年

7 王琪;人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合β-磷酸三鈣的骨組織工程學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

8 田新;臍血及臍帶靜脈內(nèi)皮下間充質(zhì)干細(xì)胞的分離擴(kuò)增與分化[D];四川大學(xué);2007年

9 索利敏;臍血間充質(zhì)干細(xì)胞體外分化為鼻黏膜纖毛上皮細(xì)胞的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年

10 尹文化;脊髓去細(xì)胞支架復(fù)合人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)大鼠脊髓全橫斷損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 杜盛陽(yáng);黃芪聯(lián)合生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2010年

2 榮靖;KGF-2和穿膜型KGF-2的構(gòu)建、純化及其對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、分化的影響[D];暨南大學(xué);2011年

3 蘇曉華;牛胎肝間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2011年

4 張麗;臍血漿活性成分分析及其對(duì)臍血CD34~+細(xì)胞增殖的影響[D];鄭州大學(xué);2011年

5 張帆;淫羊藿苷誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2011年

6 李保環(huán);臍血干細(xì)胞移植術(shù)在潰瘍性結(jié)腸炎治療中的臨床應(yīng)用[D];山東大學(xué);2011年

7 周小波;人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)與擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

8 王金良;清腦靈含藥血清誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化成神經(jīng)元樣細(xì)胞[D];華中科技大學(xué);2010年

9 王柱;早產(chǎn)兒與足月兒臍血間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)及鑒定[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2011年

10 王興凱;VEGF誘導(dǎo)成神經(jīng)分化的間充質(zhì)干細(xì)胞定向遷移研究[D];蘇州大學(xué);2011年

本文編號(hào)：700444