本文關(guān)鍵詞：靶向ezrin、radixin、moesin的siRNA慢病毒感染原代肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)流感病毒的復(fù)制

  更多相關(guān)文章： 小干擾RNA ezrin radixin moesin 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞 流感病毒 復(fù)制

【摘要】：目的構(gòu)建分別靶向ezrin(E)、radixin(R)、moesin(M)的siRNA慢病毒表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染原代大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞,觀察其對(duì)E、R、M基因表達(dá)及流感病毒復(fù)制的影響。方法根據(jù)siRNA設(shè)計(jì)原理,化學(xué)合成靶向大鼠E、R、M基因的siRNA序列,克隆入慢病毒表達(dá)質(zhì)粒GV248,構(gòu)建分別靶向E、R、M基因的慢病毒siRNA載體Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA,同時(shí)構(gòu)建靶向無(wú)關(guān)序列的Lenti-control-siRNA;組織塊法分離培養(yǎng)大鼠原代肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(PMVEC);Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA轉(zhuǎn)染原代大鼠PMVEC后,熒光定量PCR檢測(cè)E、R、M的mRNA的表達(dá),Western blot法檢測(cè)ERM蛋白的表達(dá),激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)ERM蛋白的分布;FM1流感病毒鼠肺適應(yīng)株感染慢病毒轉(zhuǎn)染的PMVEC后,熒光定量PCR檢測(cè)慢病毒載體對(duì)流感病毒復(fù)制的影響。結(jié)果重組質(zhì)粒經(jīng)測(cè)序鑒定,Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-MsiRNA、Lenti-control-siRNA構(gòu)建成功。慢病毒載體轉(zhuǎn)染大鼠PMVEC,感染復(fù)數(shù)(MOI)為10時(shí)感染率達(dá)80%以上。Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA明顯抑制PMVEC中E、R、M的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)。流感病毒感染PMVEC中,慢病毒空載體及Lenti-control-siRNA抑制流感病毒的復(fù)制,而Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA增加PMVEC中流感病毒的mRNA水平。結(jié)論成功構(gòu)建靶向ERM基因的慢病毒載體,證實(shí)其可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PMVEC特異高效地抑制E、R、M基因表達(dá);慢病毒載體本身能抑制PMVEC中流感病毒復(fù)制,而靶向E、R、M的慢病毒siRNA卻促進(jìn)流感病毒的復(fù)制。
【作者單位】： 北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)病原系;上海市復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科;
【關(guān)鍵詞】： 小干擾RNA ezrin radixin moesin 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞 流感病毒 復(fù)制
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81102697) 北京中醫(yī)藥大學(xué)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)“經(jīng)方現(xiàn)代應(yīng)用關(guān)鍵科學(xué)問題的基礎(chǔ)研究”(2011-CXD-04)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 埃茲蛋白(ezrin,E)、根蛋白(radixin,R)和膜突蛋白(moesin,M),是細(xì)胞骨架-細(xì)胞膜連接蛋白,在不同種屬間具有高度的同源性,屬于血紅蛋白4.1超家族[1]。ERM蛋白的結(jié)構(gòu)和功能具有高度同源性,在氨基末端有1個(gè)高度保守的FERM(four-point-one-protein,ezrin,radixin,moesin)功能域,

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 封欣嬋;柴進(jìn);程英;陳文生;;Radixin定點(diǎn)突變過表達(dá)對(duì)HepG2細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Bsep的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年10期

2 鄧振宇;馮宇鵬;何小科;;NF-κB信號(hào)通路參與miR-183抑制結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲和遷移性研究[J];解剖學(xué)研究;2014年03期

3 蘇占海;劉永年;安玲;王榮華;喬金婉;解亞麗;;ezrin蛋白在青海撒拉族和漢族胃癌中的表達(dá)及其生物學(xué)功能研究[J];青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年01期

4 馬月霞;郭亞麗;劉建;王玉光;;血必凈注射液干預(yù)甲型H1N1流感重癥肺炎小鼠的療效及機(jī)制研究[J];世界中醫(yī)藥;2015年02期

5 陳淑華;閭宏偉;;S1P及其受體在心血管系統(tǒng)中的作用[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2013年17期

6 施卉;任成山;;急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征基礎(chǔ)及臨床研究進(jìn)展[J];中華肺部疾病雜志(電子版);2013年04期

7 王龍梅;閆琳;楊俠;董曉光;徐海峰;;高氧對(duì)小鼠視網(wǎng)膜新生血管模型中根蛋白的影響[J];眼科新進(jìn)展;2014年03期

8 李忠堂;從玉文;張慶林;楊日芳;;鞘氨醇-1-磷酸-1型受體選擇性配體研究進(jìn)展[J];中國(guó)新藥雜志;2014年07期

9 蘇占海;劉永年;李斌;王榮華;喬金婉;解亞麗;;低氧條件下Ezrin蛋白對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和黏附能力影響的研究[J];中國(guó)婦幼保健;2014年16期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 唐軍;FAT10在H5N1病毒及甲型H1N1流感病毒復(fù)制及誘導(dǎo)人呼吸道上皮細(xì)胞凋亡中的作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

2 溫宗梅;NOD2信號(hào)通路在失血性休克/復(fù)蘇后急性肺損傷中作用機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

3 寧蓬勃;豬瘟病毒石門株與C株感染宿主細(xì)胞差異表達(dá)基因及其在病毒致病中的作用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

4 金鐵峰;BEZ235和TSA協(xié)同抑制肺癌機(jī)制及Ezrin蛋白的標(biāo)志物作用研究[D];延邊大學(xué);2014年

5 周鵬;microRNA-363通過下調(diào)S1PR1抑制肝癌細(xì)胞增殖[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

6 張健;Ezrin蛋白在骨肉瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及黃芩素對(duì)其表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 李佳;法舒地爾對(duì)脂多糖誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷的影響[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2014年

2 程巧;S1P_1特異性受體激動(dòng)劑CYM-5442在異基因造血干細(xì)胞移植后急性GVHD中的作用及其機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2014年

3 徐靜;Ezrin在結(jié)直腸癌的表達(dá)及其臨床病理意義的Meta分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張錦彬;閻錫蘊(yùn);;CD146 promotes cell migration through interaction with moesin[A];第二屆全國(guó)“跨學(xué)科蛋白質(zhì)研究”學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2008年

2 王茜;范愛輝;袁詠軍;蕭艷;黃巧冰;;Moesin在內(nèi)皮細(xì)胞血管新生中的作用[A];中國(guó)微循環(huán)學(xué)會(huì)2014年全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議大會(huì)匯編[C];2014年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張寧;慢病毒介導(dǎo)moesin基因沉默對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[D];華中科技大學(xué);2009年

2 張_g;moesin在胰腺癌嗜神經(jīng)性中的分子機(jī)制及與疼痛的相關(guān)性[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 歐陽(yáng)明;體外RNAi下調(diào)ERM表達(dá)對(duì)人胃癌SGC細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：700179