本文關(guān)鍵詞：人巨細(xì)胞病毒臨床病毒株UL148基因編碼蛋白抗體制備及其免疫原性研究

  更多相關(guān)文章： 人巨細(xì)胞病毒 UL148 B細(xì)胞表位 多肽免疫

【摘要】：目的: 制備人巨細(xì)胞病毒（HCMV）臨床病毒株UL148基因的抗體并對其進(jìn)行免疫原性分析。 方法： 1.應(yīng)用生物信息學(xué)方法，以HCMV臨床病毒株D2UL148基因氨基酸序列為基礎(chǔ)，采用SOPMA、GOR、HNN方法預(yù)測二級結(jié)構(gòu)，結(jié)合跨膜結(jié)構(gòu)、HoppWoods親水性方案、Zimmerman極性方案、Emini可及性方案、Jameson-Wolf抗原性方案及柔韌性參數(shù)綜合預(yù)測UL148基因B細(xì)胞表位。 2.化學(xué)合成法合成3條HCMV UL148基因分值較高的抗原多肽，，并予免疫新西蘭大白兔（經(jīng)初次免疫及加強(qiáng)免疫后）獲取免疫兔血清，飽和硫酸銨沉淀法純化兔血清中相應(yīng)多肽抗體，并用間接Elisa法鑒定3條多肽在不同免疫時(shí)間的抗體效價(jià)及免疫原性。 3.將HCMV病毒接種于生長狀態(tài)良好的人包皮成纖維細(xì)胞（HFF），提取病毒感染后的細(xì)胞總蛋白，采用Western Blot免疫沉淀法鑒定HCMV UL148基因相應(yīng)抗體反應(yīng)的特異性及敏感性。 結(jié)果： 1.綜合多種預(yù)測方法，HCMV UL148基因265-275、221-229、18-25位氨基酸序列區(qū)域內(nèi)或其附近主要以無規(guī)則卷或β-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)為主，且抗原指數(shù)較高，確定P1(HCMV UL148265-275)、P2（HCMV UL14818-25）、P3（HCMV UL148221-229）為HCMV UL148基因候選B細(xì)胞表位。 2.合成的3條多肽于1w、3w、5w不同時(shí)間段免疫新西蘭大白兔，經(jīng)初次免疫（1w）及加強(qiáng)免疫（3w、5w）后可明顯誘導(dǎo)新西蘭大白兔免疫血清抗體滴度增高；經(jīng)間接Elisa法檢測可得3條多肽均能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，抗體效價(jià)隨著免疫次數(shù)增加而升高，最高達(dá)1：12800以上。 3.經(jīng)Western Blot免疫沉淀法鑒定，感染HCMV后的人包皮成纖維細(xì)胞能與P3多肽（HCMV UL148221-229）誘導(dǎo)的新西蘭大白兔的抗體呈陽性反應(yīng)，與P1、P2呈陰性反應(yīng)。 結(jié)論： 1.應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)，成功篩選了具有重復(fù)性好、抗原指數(shù)高的3條HCMV UL148基因候選B細(xì)胞表位。 2.化學(xué)合成的3條多肽，均能免疫新西蘭大白兔產(chǎn)生抗體，隨著免疫加強(qiáng)，其抗體水平相應(yīng)增高。 3. P3（HCMV UL148221-229）抗體能與臨床病毒株HCMV UL148基因發(fā)生特異性結(jié)合，該抗體為研究HCMV臨床病毒株UL148蛋白的功能及其免疫學(xué)特性奠定重要基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：人巨細(xì)胞病毒 UL148 B細(xì)胞表位 多肽免疫
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 目錄2-4
• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 縮略詞表9-10
• 第一章 前言10-17
• 1. HCMV 概述10-11
• 2. HCMV 研究現(xiàn)況11-14
• 3. HCMV UL148 基因研究現(xiàn)狀14-15
• 4. B 細(xì)胞抗原表位研究現(xiàn)狀15-16
• 5. 本課題研究的意義16-17
• 第二章 技術(shù)路線17-18
• 第三章 儀器及材料18-21
• 1. 主要儀器18-19
• 2. 實(shí)驗(yàn)材料19-21
• 2.1 主要試劑19-20
• 2.2 菌種和病毒株20
• 2.3 其他主要試劑配方20-21
• 第四章 研究內(nèi)容21-35
• 1．HCMV UL148 基因 B 細(xì)胞抗原表位預(yù)測及分析21-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料21
• 1.2 HCMV UL148 基因 B 細(xì)胞表位預(yù)測方案21
• 1.3 HCMV UL148 基因 B 細(xì)胞表位合成21-22
• 2．HCMV UL148 基因的抗體制備22-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料22
• 2.2 免疫動(dòng)物及血清抗體制備22-23
• 3．酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定抗體血清效價(jià)23-24
• 3.1 ELISA 法測定第 1w、3w、5w 兔血清抗體效價(jià)23-24
• 3.2 ELISA 法測定第 5w 兔產(chǎn)生血清抗體工作濃度24
• 4．HCMV UL148 基因抗體鑒定24-35
• 4.1 HFF 細(xì)胞培養(yǎng)24-25
• 4.2 HCMV 病毒培養(yǎng)及鑒定25-31
• 4.3 HCMV 感染細(xì)胞后總蛋白提取31-32
• 4.4 Western Blot 鑒定 HCMV UL148 基因抗體32-35
• 第五章 結(jié)果與分析35-46
• 1．HCMV UL148 基因 B 細(xì)胞抗原表位預(yù)測及分析35-39
• 1.1 HCMV UL148 基因氨基酸序列35
• 1.2 HCMV UL148 基因 B 細(xì)胞表位多種方案預(yù)測結(jié)果35-38
• 1.3 P1、P2、P3 多肽合成結(jié)果38-39
• 2．酶聯(lián)免疫法（ELISA）對抗血清效價(jià)的測定結(jié)果39-41
• 2.1 ELISA 測定第 1w、3w、5w 兔產(chǎn)生血清抗體效價(jià)結(jié)果39-40
• 2.2 ELISA 測定第 5w 兔產(chǎn)生血清抗體工作濃度結(jié)果40-41
• 3．HCMV UL148 基因抗體鑒定41-46
• 3.1 HFF 細(xì)胞的培養(yǎng)41-42
• 3.2 HCMV 病毒培養(yǎng)及鑒定結(jié)果42-44
• 3.3 全蛋白提取物蛋白定量（BCA 法）44-45
• 3.4 Western Blot 鑒定 HCMV UL148 基因抗體結(jié)果45-46
• 第六章 討論46-49
• 1．B 細(xì)胞抗原表位的選擇46-47
• 2．多克隆抗體制備47-48
• 3．HCMV 的感染及鑒定48-49
• 第七章 結(jié)論和展望49-50
• 1．結(jié)論49
• 2．研究展望49-50
• 參考文獻(xiàn)50-52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭媛媛;王波;胡兢晶;蘇海浩;丁俊彩;謝斌華;伍苑賓;;人巨細(xì)胞病毒臨床分離株的鑒定及UL148基因分析[J];中國婦幼保健;2012年22期

本文編號：698219