本文關(guān)鍵詞：羊布魯桿菌脂蛋白OMP19單克隆抗體制備與鑒定

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【摘要】：目的制備與鑒定羊布魯桿菌脂蛋白OMP19單克隆抗體,用于布菌感染免疫機(jī)制研究。方法將OMP19基因連接入pET-30a(+)表達(dá)載體中,構(gòu)建pET-30a(+)/OMP19質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化入大腸埃希氏菌BL21(E3),以不同濃度異丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),采用鎳金屬螯合親和層析(NI-NTA)純化;以布菌陽(yáng)性血清檢測(cè)重組蛋白免疫反應(yīng)性,并利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體,以天然OMP19蛋白及布菌外膜蛋白提取物(NMP)對(duì)制備的單克隆抗體進(jìn)行Western Blot及酶免疫染色試驗(yàn)(IEST)鑒定。結(jié)果表達(dá)了OMP19蛋白,分子量約19kDa,通過(guò)純化純度可達(dá)95%,Western Blot分析顯示蛋白具有良好的抗原性,并制備了OMP19抗原23株鼠源性單克隆抗體,鑒定結(jié)果顯示22(95.65%)株能與天然OMP19蛋白反應(yīng),18(78.26%)株能與NMP反應(yīng),其中IgG1(k)亞型占91.30%;4株能與羊種布魯氏菌菌涂片反應(yīng)。結(jié)論成功制備具有良好抗原性的重組OMP19蛋白,篩選出識(shí)別天然蛋白的單克隆抗體,已初步應(yīng)用于布菌的檢測(cè),為OMP19抗原B細(xì)胞表位的篩選奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)系;韶關(guān)學(xué)院英東生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 布魯桿菌 OMP 蛋白表達(dá) 單克隆抗體
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31372443;31100657) 廣東省自然基金項(xiàng)目(2011B090400407)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 布魯氏菌病(Brucellosis,布病),是布魯桿菌(簡(jiǎn)稱(chēng)布菌)引起的急性或慢性傳染病,屬?lài)?yán)重人獸共患傳染病。近年來(lái),通過(guò)接觸帶菌動(dòng)物造成羊、牛布魯桿菌病感染的病例大量增加,根據(jù)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心公布數(shù)據(jù),2013年布病發(fā)病人數(shù)比2008年增加57%,達(dá)43 486例,以每年10%新增速度成

【參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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本文編號(hào)：694068