本文關(guān)鍵詞：人表皮干細(xì)胞的成釉分化研究

  更多相關(guān)文章： 人表皮干細(xì)胞 嵌合體牙齒 MSX2 SP3 SP6 FGFs

【摘要】：哺乳動物牙齒發(fā)育和許多器官發(fā)育一樣,都是由上皮和間充質(zhì)的相互作用發(fā)育而來。組織工程重組牙齒的構(gòu)建需要上皮來源和間充質(zhì)來源干細(xì)胞共同參與完成。由于牙齒萌發(fā)后,成釉質(zhì)細(xì)胞發(fā)生凋亡,在成體中不存在牙源性的上皮干細(xì)胞。因此,成釉質(zhì)細(xì)胞的來源問題成為牙齒再生研究的主要挑戰(zhàn)之一。已有研究表明,在外源添加FGF8生長因子的條件下,E13.5小鼠磨牙間充質(zhì)能夠誘導(dǎo)人表皮干細(xì)向成釉細(xì)胞分化,并分泌釉質(zhì)。 表皮干細(xì)胞的成釉分化過程還不明確,對表皮干細(xì)胞成釉分化過程進(jìn)行研究,相關(guān)結(jié)果可以為進(jìn)一步優(yōu)化重組嵌合體體系,提供理論依據(jù)。 在腎囊膜下培養(yǎng)的嵌合體牙胚與與正常牙胚發(fā)育一樣,經(jīng)歷了上皮的聚集、下陷,間充質(zhì)的聚集,牙本質(zhì)和牙釉質(zhì)的分泌的過程。在30d內(nèi)完成了牙釉質(zhì)的分泌。嵌合體牙胚模擬了小鼠牙胚發(fā)育過程,來源于人表皮干細(xì)胞的上皮快速分化,形成成釉細(xì)胞,并分泌釉質(zhì)。 對嵌合體牙齒進(jìn)行SEM分析以及機(jī)械性質(zhì)評價可以發(fā)現(xiàn),移植到腎囊膜下培養(yǎng)形成的嵌合體牙胚,牙釉質(zhì)經(jīng)歷了由疏松到致密的過程,嵌合體牙齒的牙本質(zhì)與牙釉質(zhì)隨著培養(yǎng)時間的增長楊氏系數(shù)和硬度逐漸升高,該過程也顯示了牙齒逐步礦化的過程。 嵌合體牙胚在不添加FGF8生長因子的條件下,存在形成的牙齒沒有釉質(zhì)或者成釉率很低的問題。檢測嵌合體牙胚成釉關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子MSX2、SP3和SP6的表達(dá)情況,初步證實,一些不添加FGF8生長因子的嵌合體牙胚不表達(dá)SP6,這可能是導(dǎo)致該問題的原因之一。 已有研究表明,FGF8可以使牙胚發(fā)育延緩。推測牙胚的發(fā)育速率可能和FGFs有關(guān)。檢測快速發(fā)育的嵌合體牙胚FGFs相關(guān)基因的表達(dá)模式。初步結(jié)果顯示,FGF3和FGF10可能是發(fā)育延緩基因；FGF4和FGF7可能與發(fā)育速率無關(guān)；高濃度的FGF9可能導(dǎo)致牙胚發(fā)育延緩。 綜上所述,本研究課題建立的嵌合體牙胚在腎囊膜下培養(yǎng)30d結(jié)束牙釉質(zhì)分泌。30d后,牙胚會繼續(xù)礦化變硬；一些不添加FGF8生長因子的嵌合體牙胚不表達(dá)SP6,這可能是嵌合體牙齒沒有釉質(zhì)或者成釉率很低的原因；FGF3、FGF9和FGF1O可能是發(fā)育延緩基因；FGF4和FGF7可能與發(fā)育速率無關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：人表皮干細(xì)胞 嵌合體牙齒 MSX2 SP3 SP6 FGFs
【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-5
• 中文文摘5-8
• 目錄8-10
• 緒論10-18
• 一、人和小鼠牙齒發(fā)育過程10-11
• 二、牙齒再生醫(yī)學(xué)研究的現(xiàn)狀11-16
• 2.1 種子細(xì)胞的來源11-12
• 2.2 小鼠牙齒發(fā)育的分子機(jī)制12-15
• 2.2.1 FGFs在小鼠牙齒發(fā)育過程中的作用13
• 2.2.2 BMPs在小鼠牙齒發(fā)育過程中的作用13-14
• 2.2.3 Shhs在小鼠牙齒發(fā)育過程中的作用14-15
• 2.2.4 Wnts在小鼠牙齒發(fā)育過程中的作用15
• 2.3 影響成釉細(xì)胞分化的其他機(jī)制15-16
• 三、本研究的意義16-18
• 第—章 材料與方法18-28
• 1.1 材料18-20
• 1.1.1 材料來源18
• 1.1.2 實驗動物18
• 1.1.3 實驗儀器18
• 1.1.4 實驗試劑18-19
• 1.1.5 試劑配制19-20
• 1.2 方法20-28
• 1.2.1 人表皮干細(xì)胞分離、培養(yǎng)20-22
• 1.2.2 培養(yǎng)液添加外源蛋白FGF8體外誘導(dǎo)處理人表皮干細(xì)胞22-23
• 1.2.3 嵌合體組織塊的重組和培養(yǎng)方法23
• 1.2.4 組織塊的處理和形態(tài)學(xué)檢測方法23-28
• 1.2.4.1 組織塊處理,石蠟包埋、切片23-24
• 1.2.4.2 H.E.染色24
• 1.2.4.3 Azan染色24-25
• 1.2.4.4 免疫組化/免疫熒光25
• 1.2.4.5 TUNEL檢測細(xì)胞凋亡25-26
• 1.2.4.6 嵌合體牙齒的SEM分析26
• 1.2.4.7 嵌合體牙齒的機(jī)械性質(zhì)分析26-28
• 第二章 實驗結(jié)果28-46
• 2.1 嵌合體牙齒的發(fā)育過程28-33
• 2.1.1 人表皮干細(xì)胞向成釉細(xì)胞分化的過程28-29
• 2.1.2 人表皮干細(xì)胞牙向分化過程中成釉細(xì)胞標(biāo)記物Amelogenin、Ameloblastin的表達(dá)周期29-30
• 2.1.3 TUNEL檢測嵌合體牙胚成釉細(xì)胞凋亡情況30-33
• 2.2 嵌合體牙齒機(jī)械性質(zhì)分析33-36
• 2.2.1 嵌合體牙齒顯微結(jié)構(gòu)分析(SEM)33-35
• 2.2.2 嵌合體牙齒機(jī)械性質(zhì)比較,以楊氏系數(shù)與硬度作為指標(biāo)35-36
• 2.3 轉(zhuǎn)錄因子MSX2、SP3、SP6對人表皮干細(xì)胞向成釉細(xì)胞分化過程的影響36-42
• 2.3.1 轉(zhuǎn)錄因子MSX2、SP3、SP6在人牙胚、小鼠磨牙和嵌合體牙胚的表達(dá)模式36-38
• 2.3.2 轉(zhuǎn)錄因子MSX2、SP3、SP6在兩種嵌合體牙胚早期分化過程的表達(dá)差異38-42
• 2.4 人表皮干細(xì)胞快速向成釉細(xì)胞分化機(jī)制初步分析42-46
• 第三章 分析與討論46-54
• 3.1 嵌合體牙齒的發(fā)育過程46-47
• 3.2 嵌合體牙齒機(jī)械性質(zhì)分析47-48
• 3.3 轉(zhuǎn)錄因子MSX2、SP3、SP6對人表皮干細(xì)胞向成釉細(xì)胞分化過程中的影響48-51
• 3.4 人表皮干細(xì)胞快速向成釉細(xì)胞分化機(jī)制初步分析51-54
• 第四章 結(jié)論54-56
• 附錄156-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 攻讀學(xué)位期間承擔(dān)的科研任務(wù)與主要成果64-66
• 致謝66-68
• 個人簡歷68-69

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 牛云飛,路衛(wèi),夏照帆,張步濤,韋多,田建廣,程大勝;表皮干細(xì)胞在人體不同部位皮膚的分布差異[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2004年09期

2 董蕊,金巖,劉源,趙宇,王容;表皮干細(xì)胞在成人及胎兒不同部位皮膚中的比較研究[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2003年18期

3 唐開亮;李紓;肖長杰;王建;于蘭;于西佼;;小鼠釉質(zhì)發(fā)育過程中成釉器中間層細(xì)胞增殖、凋亡以及組織非特異性堿性磷酸酶的表達(dá)[J];上海口腔醫(yī)學(xué);2008年01期

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本文編號：693090