本文關(guān)鍵詞：聚乙烯亞胺介導(dǎo)三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞的條件優(yōu)化

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【摘要】：本研究用聚乙烯亞胺(PEI)介導(dǎo)表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP)的rAAV包裝系統(tǒng)(pAAV-CMV-GFP、pAAVRC和pHelper)轉(zhuǎn)染人胚腎293細(xì)胞(HEK293細(xì)胞)。用ImagePro Plus6.0圖像分析軟件計(jì)算表達(dá)GFP的細(xì)胞比例來測(cè)定1、2、3、4、5、6μg/孔不同質(zhì)粒劑量,1∶1、3∶1、5∶1、7∶1不同PEI/質(zhì)粒比值及轉(zhuǎn)染12、24、36、48、60、72h不同時(shí)間三個(gè)變量對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響,以優(yōu)化PEI介導(dǎo)三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞的條件。結(jié)果顯示,質(zhì)粒劑量為4μg/孔、PEI/質(zhì)粒比值為3∶1~5∶1時(shí)轉(zhuǎn)染效率維持較高水平;轉(zhuǎn)染效率-轉(zhuǎn)染時(shí)間曲線為S型增長曲線,轉(zhuǎn)染效率于60h達(dá)到平臺(tái)期。優(yōu)化PEI轉(zhuǎn)染條件能增加三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。
【作者單位】： 湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院;湖南省人民醫(yī)院心血管內(nèi)科;中南大學(xué)湘雅公共衛(wèi)生學(xué)院流行病學(xué)與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)系;中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院生物醫(yī)藥與技術(shù)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 聚乙烯亞胺 腺相關(guān)病毒 HEK細(xì)胞 轉(zhuǎn)染效率 條件優(yōu)化
【基金】：長沙市民生科技支撐專項(xiàng)基金資助項(xiàng)目(K1106022-31)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 引言近年來,腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus,AAV)作為基因治療的載體,由于具有良好的安全性及較弱的免疫原性等優(yōu)點(diǎn),在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、臨床試驗(yàn)中應(yīng)用漸多[1-3]。目前制備重組AAV(recombinantAAV,rAAV)主要采用一種三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染人胚腎293(HEK293)細(xì)胞的包裝系統(tǒng)[4]。如何讓三質(zhì)

【共引文獻(xiàn)】

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