本文關(guān)鍵詞：2型糖尿病獼猴模型創(chuàng)建及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療

  更多相關(guān)文章： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 2型糖尿病 獼猴 SPIO STZ

【摘要】：目的：1.體外培養(yǎng)、鑒定獼猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并用SPIO和DAPI雙標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；2.建立2型糖尿病獼猴模型的制作及評(píng)價(jià)方法；3.將SPIO和DAPI雙標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)胰尾動(dòng)脈移植治療2型糖尿病獼猴,觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)的分布、分化情況,及對(duì)2型糖尿病獼猴的治療效果。方法：1.獼猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及標(biāo)記：健康5歲齡獼猴麻醉后,行髂后上棘骨髓穿刺獲得骨髓15ml,采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)得到貼壁的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,采用細(xì)胞形態(tài)觀察及流式細(xì)胞術(shù)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定。當(dāng)?shù)?代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞融合達(dá)80%,加入SPIO(?)DAPI溶液培養(yǎng)24h后,通過(guò)普魯士藍(lán)染色和透射電鏡鑒定SPIO標(biāo)記陽(yáng)性率；通過(guò)熒光顯微鏡觀察DAPI標(biāo)記陽(yáng)性率。2.2型糖尿病獼猴模型的建立：將12只健康獼猴隨機(jī)分為正常對(duì)照組(對(duì)照組,n=3)：不做任何處理；糖尿病模型組(模型組,n=9)：給予高糖高脂飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(30mg/kg)造模。再將糖尿病模型組分為兩組：模型對(duì)照組(模型對(duì)照組,n=3)：模型對(duì)照組注入2mL生理鹽水；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療組(治療組,n=6)：將其隨機(jī)分為兩組即治療A組：注入雙標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸液；治療B組：注入未標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸液。3.SPIO和DAPI雙標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療2型糖尿病獼猴的療效評(píng)價(jià)：將SPIO和DAPI雙標(biāo)記的獼猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)胰尾動(dòng)脈移植入治療組獼猴,并于移植后3、7、14、21天(d)行MR掃描,通過(guò)掃描到的信號(hào)變化印證標(biāo)記的干細(xì)胞在體內(nèi)的分布情況；移植后1、6周(w)采集外周血血清測(cè)定空腹血糖(FBG)、血脂、胰島素、C-肽水平,通過(guò)靜脈葡萄糖耐量試驗(yàn)(IVGTT)、C-肽釋放試驗(yàn)(ACR)檢測(cè)胰腺胰島功能；移植后4w取胰腺、腎臟、肝臟組織行病理組織學(xué)檢查,行常規(guī)HE染色、普魯士藍(lán)染色及熒光染色,觀察移植細(xì)胞在體內(nèi)的分布情況。結(jié)果：1.細(xì)胞形態(tài)觀察及鑒定結(jié)果：原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)3-4d后細(xì)胞分裂增殖明顯,出現(xiàn)形態(tài)均一的細(xì)胞增殖集落,培養(yǎng)至10-14d,80%以上細(xì)胞趨于融合,呈典型的長(zhǎng)梭形、漩渦狀成纖維細(xì)胞樣形態(tài),分布均勻。第3代干細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)：貼壁細(xì)胞均高表達(dá)CD29、CD44、CD90、CD105,低表達(dá)造血細(xì)胞表型CD31、CD34。2.SPI0和DAPI雙標(biāo)記的干細(xì)胞鑒定結(jié)果：DAPI標(biāo)記第3代干細(xì)胞12h后,熒光顯微鏡下,可見細(xì)胞核發(fā)明亮藍(lán)色熒光,標(biāo)記陽(yáng)性率達(dá)98%；SPIO標(biāo)記干細(xì)胞24h,普魯士藍(lán)染色可見95%干細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有大量藍(lán)色致密顆粒分布。透射電鏡顯示標(biāo)記的BMSCs胞質(zhì)中有高密度的鐵粒子密集,細(xì)胞質(zhì)中存在的小囊泡狀結(jié)構(gòu)內(nèi)攝入高密度的鐵粒子。3.模型組獼猴血生化指標(biāo)變化情況：從造模前到造模后12w,模型組獼猴FBG由(3.6±0.8)mmol/L升高至(21.5±4.1)mmol/L;外周血中胰島素、C-肽顯著降低；血脂顯著升高,與對(duì)照組相比均具有顯著性差異(p0.05)；IVGTT可見曲線下面積明顯增加；ACR可見曲線下面積明顯減小。4.模型組獼猴胰腺、肝臟、腎臟組織病理學(xué)觀察結(jié)果：模型組胰腺切片HE染色、PAS染色及masson染色可見胰島數(shù)目減少,胰島萎縮,結(jié)構(gòu)被破壞,有大量的糖原沉積等糖尿病胰腺病變；模型組獼猴肝臟切片HE染色、PAS染色可見肝小葉結(jié)構(gòu)破壞,肝索排列紊亂,竇間隙變窄,肝細(xì)胞體積增大,肝細(xì)胞脂肪變性,伴有肝細(xì)胞壞死,及大量糖原沉積等肝細(xì)胞脂肪病變；模型組腎臟切片HE染色、PAS染色及(?)masson染色可見腎系膜明顯增厚,腎小球肥大,有大量的糖原沉積等典型糖尿病腎臟病變。而對(duì)照組胰腺、肝臟及腎臟組織未見病變。5.移植雙標(biāo)記的干細(xì)胞體內(nèi)分布情況：與模型對(duì)照組及對(duì)照組相比,治療組于標(biāo)記的干細(xì)胞移植后3、7、14d MR檢查可見胰腺、腎臟組織影像學(xué)信號(hào)改變。標(biāo)記的干細(xì)胞移植后4w組織病理切片示,胰腺、腎臟組織切片經(jīng)普魯士藍(lán)染色可見普魯士藍(lán)藍(lán)染細(xì)胞；經(jīng)熒光染色后熒光顯微鏡下可見藍(lán)色熒光信號(hào)細(xì)胞。6.干細(xì)胞移植后生化指標(biāo)變化情況：干細(xì)胞移植后第6w FBG由移植前的(21.5±4.1)mmol/L降至(11.4±2.1)mmol/L,外周血中胰島素、C-肽明顯升高；血脂明顯下降,與模型對(duì)照組相比差異均具有顯著意義(p0.05)。IVGTT可見曲線下面積明顯減小；ACR可見曲線下面積明顯增加。結(jié)論：1.采用全骨髓貼壁法成功分離培養(yǎng)獲得高純度獼猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,純度達(dá)95.1%。2.SPIO和DAPI成功標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,標(biāo)記陽(yáng)性率達(dá)95%～98%。3.成功建立了高糖高脂飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素誘導(dǎo)2型糖尿病獼猴模型的制作方法,其成模率達(dá).100%。4.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療2型糖尿病獼猴能降低血糖、血脂,減輕胰島素抵抗；通過(guò)磁共振活體示蹤及內(nèi)臟組織病理學(xué)觀察標(biāo)記的細(xì)胞在胰腺、腎臟的分布,說(shuō)明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療2型糖尿病是有效的。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 2型糖尿病 獼猴 SPIO STZ
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R587.1;R-332
【目錄】：

• 主要縮略名稱中英文對(duì)照表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-17
• 1 材料與方法17-28
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料17-20
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法20-27
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理27-28
• 2 結(jié)果28-41
• 2.1 BMSCs的培養(yǎng)和擴(kuò)增結(jié)果28
• 2.2 BMSCs表面標(biāo)志物分析結(jié)果28-30
• 2.3 DAPI標(biāo)記的BMSCs結(jié)果30
• 2.4 SPIO標(biāo)記的BMSCs鑒定結(jié)果30-31
• 2.5 DAPI和SPIO雙標(biāo)記對(duì)BMSCs形態(tài)的影響31
• 2.6 MTT法檢測(cè)標(biāo)記的BMSCs增殖活力變化31
• 2.7 T2DM稱猴模型的評(píng)價(jià)31-32
• 2.8 空腹血糖變化情況32
• 2.9 靜脈葡萄糖耐量試驗(yàn)結(jié)果32-33
• 2.10 C-肽釋放試驗(yàn)結(jié)果33
• 2.11 血生化指標(biāo)變化情況33-34
• 2.12 磁共振活體成像示蹤結(jié)果34-35
• 2.13 病理學(xué)觀察結(jié)果35-40
• 2.14 移植雙標(biāo)記的細(xì)胞體內(nèi)分布情況40-41
• 3 討論41-45
• 3.1 BMSCs作為治療2型糖尿病種子細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)41
• 3.2 2型糖尿病模型動(dòng)物的選擇及制作41-42
• 3.3 干細(xì)胞標(biāo)記方案的選擇及其安全性的檢測(cè)42-43
• 3.4 SPIO標(biāo)記的干細(xì)胞MR活體成像43-45
• 4 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 綜述50-56
• 參考文獻(xiàn)54-56
• 在讀期間發(fā)表論文56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 曹廷兵,閆振成,沈成義,王利娟,聶海,鐘健,祝之明;代謝綜合征大鼠模型的建立及其相關(guān)基因表達(dá)變化的研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2005年08期

2 董麗;劉敏;宋光耀;王敬;;銀杏葉提取物對(duì)高脂喂養(yǎng)胰島素抵抗大鼠胰島β細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2009年22期

3 王保偉;李穎;劉曉紅;劉爽;孫長(zhǎng)顥;;高脂飼料喂養(yǎng)時(shí)間及鏈脲佐菌素劑量對(duì)實(shí)驗(yàn)型2型糖尿病大鼠造模的影響[J];衛(wèi)生研究;2011年01期

4 陳紅;王延蛟;焦誼;孫麗麗;庫(kù)熱西·玉努斯;關(guān)亞群;;代謝綜合征大鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究[J];新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年09期

5 龍惠東;林云恩;曾昭華;梁麗英;藍(lán)忠;張海軍;;一種新的代謝綜合征大鼠模型的建立[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2010年12期

6 黃浙勇;葛均波;楊?yuàn)?張少衡;黃榕，

本文編號(hào)：687367