本文關(guān)鍵詞：流感病毒在MDCK細(xì)胞上培養(yǎng)條件的優(yōu)化分析

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【摘要】：目的優(yōu)化甲、乙型流感病毒在MDCK細(xì)胞上的培養(yǎng)條件,提高流感病毒的分離效果。方法將5種流感病毒液(甲型流感病毒:甲型H1N1、季節(jié)性H1N1、季節(jié)性H3N2和乙型流感病毒:Victoria、Yamagata)分別接種于MDCK細(xì)胞,通過(guò)比較不同的病毒接種量(30μl/cm2、60μl/cm2、90μl/cm2、120μl/cm2、150μl/cm2)、不同的病毒孵育時(shí)間(0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h)、不同的TPCK-胰酶添加濃度(1.0μg/ml、2.0μg/ml、3.0μg/ml、4.0μg/ml、5/0μg/ml)以及不同的MDCK細(xì)胞增毒代次(連續(xù)盲傳5代)對(duì)5種流感病毒易感性的影響,確定其最佳分離效果;對(duì)分離后的病毒以紅細(xì)胞凝集(HA)方法檢測(cè)病毒滴度,結(jié)果通過(guò)對(duì)比病毒HA滴度結(jié)果,5種流感病毒(甲型H1N1、季節(jié)性H1N1、季節(jié)性H3N2、Victoria和Yamagata)的最佳病毒接種量分別為:90μl/cm2、90μl/cm2、60μl/cm2、120μl/cm2、120μl/cm2;最佳病毒孵育時(shí)間:甲型流感病毒為1.0~1.5 h,乙型流感病毒為2.0~2.5 h;胰酶最佳使用濃度分別是:2.0μg/ml、2.0μg/ml、2.0μg/ml、3.0μg/ml、3.0μg/ml;最適宜的細(xì)胞增毒傳代次數(shù)為:1代、3代、2代、2代、2代;甲型流感病毒經(jīng)培養(yǎng)后病毒的HA滴度低于乙型流感,甲型H1N1流感病毒經(jīng)培養(yǎng)后HA滴度較低。結(jié)論甲型流感病毒對(duì)MDCK細(xì)胞的易感性低于乙型流感病毒;甲型H1N1流感病毒的分離效果低于季節(jié)性H1N1和季節(jié)性H3N2;Victoria與Yamagata的分離條件基本相同。
【作者單位】： 錦州市疾病預(yù)防控制中心;渤海大學(xué);遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院;遼寧省疾病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 流感病毒 MDCK細(xì)胞 分離培養(yǎng)
【基金】：國(guó)家重大傳染病防治科技重大專項(xiàng)項(xiàng)目(2012ZX10004209-001) 食源性致病微生物的生物信息學(xué)研究(LT2014024)
【分類號(hào)】：R373.13
【正文快照】： 流感病毒可分為甲、乙和丙3種型別,其中甲型流感病毒因其抗原性易發(fā)生變異,傳染性強(qiáng),容易造成人和禽畜的死亡[1-3];乙型流感病毒與甲型病毒有許多相似特征,乙型流感病毒主要感染人,常常引起局部暴發(fā)。目前,采用MDCK細(xì)胞來(lái)分離流感病毒,所分離的毒株抗原性和基因特性比較穩(wěn)定更

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本文編號(hào)：679815