本文關(guān)鍵詞：Methylcobalamin在背根節(jié)慢性壓迫大鼠模型上的外周鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制

  更多相關(guān)文章： methylcobalamin 神經(jīng)病理性痛 DRG 自發(fā)放電 觸誘發(fā)痛 興奮性 I_h電流

【摘要】：背根節(jié)慢性壓迫（chronic compression of dorsal root ganglion, CCD）神經(jīng)病理性痛模型能有效的模擬腰椎間盤突出，椎管狹窄和腫瘤壓迫等原因造成的臨床上常見的腰背痛和坐骨神經(jīng)痛。CCD大鼠模型背根節(jié)神經(jīng)元膜上離子通道表達(dá)和功能改變導(dǎo)致其興奮性的變化，背根節(jié)（dorsal root ganglion, DRG）有自發(fā)放電（spontaneousactivity）出現(xiàn)。由于外周傳入沖動(dòng)的增加，造成脊髓和高位中樞的持續(xù)性興奮和敏化，導(dǎo)致神經(jīng)病理性痛癥狀的出現(xiàn)。損傷感覺神經(jīng)元胞體或軸突產(chǎn)生的自發(fā)放電是疼痛產(chǎn)生和維持的重要基礎(chǔ)，異位自發(fā)放電成為評(píng)價(jià)和研究鎮(zhèn)痛藥物及其機(jī)制的一種手段。 最近的研究發(fā)現(xiàn)methylcobalamin (MeCbl)能夠改善非特異性腰痛患者的疼痛評(píng)分，有報(bào)道指出B12單獨(dú)使用或者與B1，B6聯(lián)合其使用有助于緩解SNL的觸誘發(fā)痛，，SCI和CCD模型的熱痛覺敏化。但是也有研究報(bào)道MeCbl不能改善腰椎椎管狹窄患者的疼痛癥狀。因此，對(duì)于MeCbl是否具有鎮(zhèn)痛作用仍存在爭(zhēng)議。MeCbl是否影響初級(jí)感覺神經(jīng)元的自發(fā)放電和興奮性尚不明確。本實(shí)驗(yàn)在CCD模型上，研究MeCbl對(duì)神經(jīng)病理性痛的作用及其機(jī)制。 超極化激活的內(nèi)向流（Hyperpolarization-activated inward currents，I_h）存在于DRG神經(jīng)元中。通過抑制神經(jīng)元超極化和促進(jìn)去極化調(diào)節(jié)細(xì)胞膜的興奮性。以往研究顯示DRG慢性壓迫的感覺神經(jīng)元I_h電流密度增加，然而，MeCbl是否影響DRG神經(jīng)元I_h電流密度未見報(bào)道。 主要結(jié)果 1. CCD大鼠表現(xiàn)雙側(cè)后足觸誘發(fā)痛和損傷側(cè)熱痛覺敏化 術(shù)后21d內(nèi)觀察并測(cè)定CCD組和sham組雙側(cè)機(jī)械縮足閾值和熱縮足潛伏期（TWL）。與sham組相比較，CCD組雙側(cè)機(jī)械縮足閾值顯著下降（損傷側(cè)：P0.001；對(duì)側(cè)：P0.001，重復(fù)測(cè)量方差分析）。損傷側(cè)CCD組TWL較sham組明顯下降而對(duì)側(cè)不存在差異（損傷側(cè)：P0.001；對(duì)側(cè)：P0.05，重復(fù)測(cè)量方差分析）。 2.連續(xù)腹腔注射MeCbl明顯抑制CCD大鼠的觸誘發(fā)痛，對(duì)TWL無影響。 觀察長(zhǎng)時(shí)程和短時(shí)程腹腔注射MeCbl對(duì)CCD大鼠的觸誘發(fā)痛和TWL的影響。數(shù)據(jù)顯示單次注射MeCbl在短時(shí)程不對(duì)CCD和sham組雙側(cè)機(jī)械縮足閾值和TWL產(chǎn)生作用(P=1.00,重復(fù)測(cè)量方差分析)。長(zhǎng)時(shí)程中，在雙側(cè)，均是5d,10d,18d,23d和28d5個(gè)點(diǎn)存在差異(損傷側(cè)：P0.05；對(duì)側(cè)：P0.01,重復(fù)測(cè)量方差分析)。長(zhǎng)時(shí)程腹腔注射MeCbl（2.5mg/kg）在第5天開始出現(xiàn)抑制CCD大鼠雙側(cè)觸誘發(fā)痛的作用，并且有時(shí)間累積效應(yīng)。雖然CCD手術(shù)前后大鼠的TWL沒有顯著降低，在長(zhǎng)時(shí)程的觀察中，CCD大鼠的TWL維持穩(wěn)定，說明長(zhǎng)時(shí)程腹腔注射MeCbl不影響CCD大鼠雙側(cè)TWL。 3. MeCbl明顯抑制CCD DRG A-類神經(jīng)元的自發(fā)放電 在62例單纖維中，66.1%對(duì)MeCbl敏感，其中83.3%的單位能在10min內(nèi)洗脫恢復(fù)至基線水平，濃度從3至300μM表現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)。MeCbl（300μmol/L）對(duì)CCD A-類DRG神經(jīng)元周期和非周期放電模式的自發(fā)放電均有抑制作用，兩者之間不存在差異。利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究MeCbl對(duì)CCD大鼠離體中型DRG神經(jīng)元自發(fā)放電的影響，發(fā)現(xiàn)在60s內(nèi)，細(xì)胞的自發(fā)放電被完全抑制，并且洗脫10min內(nèi)恢復(fù)。 4. MeCbl明顯抑制CCD中型DRG細(xì)胞的興奮性 與sham組相比，CCD大鼠中型DRG神經(jīng)元AP的幅值和最大上斜率都明顯增大(P0.05，n=32，單因素方差分析)。而MeCbl顯著降低CCD中型DRG神經(jīng)元的興奮性，表現(xiàn)AP幅值、AHP幅值、最大上升斜率和最大下降斜率明顯下降(P0.01,n=34,配對(duì)t檢驗(yàn))；半寬顯著增大(P0.05, n=34,配對(duì)t檢驗(yàn))。 5. MeCbl明顯減小CCD DRG中型DRG細(xì)胞的I_h電流密度 CCD組的超極化激活的I_h電流密度較sham組顯著升高(P0.05，重復(fù)測(cè)量方差分析)。MeCbl作用于CCD和sham組DRG，明顯降低CCD組中型DRG細(xì)胞I_h電流密度而不影響sham組(P0.05,重復(fù)測(cè)量方差分析)。 主要結(jié)論： 1.長(zhǎng)時(shí)程腹腔注射MeCbl可明顯抑制CCD大鼠雙側(cè)觸誘發(fā)痛，不影響CCD大鼠雙側(cè)TWL；對(duì)sham大鼠機(jī)械閾值無影響。 2. MeCbl明顯抑制在體、離體CCD DRG A-類神經(jīng)元的SA。MeCbl（300μmol/L）對(duì)在體A-類神經(jīng)元的SA抑制作用與放電模式無關(guān)。 3. MeCbl明顯降低CCD中型DRG神經(jīng)元的興奮性，明顯降低AP幅值、AHP幅值、最大上升斜率和最大下降斜率；明顯增大半寬。 4. MeCbl顯著降低CCD中型DRG神經(jīng)元I_h電流密度。
【關(guān)鍵詞】：methylcobalamin 神經(jīng)病理性痛 DRG 自發(fā)放電 觸誘發(fā)痛 興奮性 I_h電流
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R-332;R745.4
【目錄】：

• 縮略語表6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-23
• 第一部分 Methylcobalamin 對(duì)背根節(jié)慢性壓迫模型痛行為的作用23-37
• 1 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物23
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥品23
• 1.3 實(shí)驗(yàn)器材23-24
• 2 實(shí)驗(yàn)方法24-26
• 2.1 背根節(jié)慢性壓迫大鼠模型的制備24-25
• 2.2 機(jī)械性觸誘發(fā)痛的測(cè)定25
• 2.3 熱痛縮足潛伏期的測(cè)定25
• 2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥方法25-26
• 3 數(shù)據(jù)處理26
• 4 結(jié)果26-34
• 4.1 CCD 大鼠的機(jī)械觸誘發(fā)痛和熱痛覺過敏26-28
• 4.2 短時(shí)程腹腔注射 MeCbl 不影響 CCD 大鼠的機(jī)械觸誘發(fā)痛和 TWL28-31
• 4.3 長(zhǎng)時(shí)程腹腔注射 MeCbl 對(duì) CCD 大鼠機(jī)械觸誘發(fā)痛和 TWL 的影響31-34
• 5 討論34-37
• 第二部分 Methylcobalamin 對(duì)損傷 DRGA-類神經(jīng)元自發(fā)放電的影響37-46
• 1 實(shí)驗(yàn)材料37-38
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物37
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥品和試劑37
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器37-38
• 1.4 實(shí)驗(yàn)溶液的配置38
• 2 實(shí)驗(yàn)方法38-39
• 2.1 CCD 大鼠模型的制備38
• 2.2 DRG A-類神經(jīng)元自發(fā)放電的引導(dǎo)38-39
• 3 數(shù)據(jù)處理39-40
• 4 結(jié)果40-44
• 4.1 損傷 DRG A-類神經(jīng)元的異位自發(fā)放電40
• 4.2 MeCbl 對(duì)損傷 DRG A-類神經(jīng)元自發(fā)放電的抑制作用40-41
• 4.3 MeCbl 對(duì)損傷 DRG A-類神經(jīng)元不同模式自發(fā)放電的抑制作用41-44
• 5 討論44-46
• 第三部分 Methylcobalamin 對(duì)中型 DRG 神經(jīng)元興奮性和 I_h的影響46-59
• 1 材料46-48
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物46
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥品和試劑46-47
• 1.3 實(shí)驗(yàn)溶液配制47
• 1.4 實(shí)驗(yàn)器材47-48
• 2 實(shí)驗(yàn)方法48-49
• 2.1 背根節(jié)標(biāo)本的制備48
• 2.2 全細(xì)胞記錄方法48-49
• 3 數(shù)據(jù)收集和統(tǒng)計(jì)分析49
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-55
• 4.1 MeCbl 抑制 CCD 模型中型 DRG 神經(jīng)元的興奮性49-54
• 4.2 CCD 中型 DRG 神經(jīng)元的 I_h電流密度顯著提高54
• 4.3 MeCbl 降低 CCD 中型 DRG 神經(jīng)元的 I_h電流密度54-55
• 5 討論55-59
• 小結(jié)59-60
• 參考文獻(xiàn)60-71
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果71-72
• 致謝72

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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本文編號(hào)：674239