本文關(guān)鍵詞：肺炎鏈球菌表面粘附素A蛋白抗原表位的預(yù)測(cè)篩選及確定

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【摘要】：【目的】確定肺炎鏈球菌表面粘附素A(Psa A)蛋白抗原的B細(xì)胞、CD4 T細(xì)胞和CD8 T細(xì)胞表位�！痉椒ā客ㄟ^(guò)生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)肺炎鏈球菌Psa A蛋白分子小鼠B細(xì)胞線性表位、MHC-Ⅰ結(jié)合肽(CD8 T細(xì)胞表位)及MHC-Ⅱ結(jié)合肽(CD4 T細(xì)胞表位)并人工合成相應(yīng)肽段;克隆重組質(zhì)粒BL21/p ET/Psa A并得到純化的r Psa A蛋白用以免疫小鼠;分離每只免疫組和對(duì)照組小鼠的血清分別與人工合成的候選B細(xì)胞表位肽段進(jìn)行間接ELISA檢測(cè),篩選B細(xì)胞表位;分離小鼠脾及淋巴結(jié)細(xì)胞并分別與人工合成的T細(xì)胞候選表位肽段體外共培養(yǎng),取上清進(jìn)行雙夾心ELISA檢測(cè)IFN-γ的量進(jìn)行初步篩選。用初篩到的表位多肽刺激小鼠的脾及淋巴結(jié)細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色及細(xì)胞流式檢測(cè),確定Psa A蛋白分子T細(xì)胞表位�！窘Y(jié)果】分析Psa A蛋白分子的B細(xì)胞表位及MHC-Ⅰ結(jié)合肽、MHC-Ⅱ結(jié)合肽;得到候選B細(xì)胞表位肽10條,MHC-Ⅰ結(jié)合肽21條,MHC-Ⅱ結(jié)合肽7條,并進(jìn)行了人工合成。利用分子生物學(xué)技術(shù)獲得了r Psa A蛋白并成功免疫了小鼠。間接ELISA結(jié)果顯示:肽段PB2、PB6,PB7與r Psa A免疫小鼠的血清發(fā)生反應(yīng),其OD450nm讀數(shù)比相應(yīng)的陰性對(duì)照小鼠顯著升高;雙夾心ELISA結(jié)果初步提示:肽段PⅠ10、PⅠ14、PⅠ17、PⅠ18、PⅠ21以及肽段PⅡ2、PⅡ5、PⅡ6刺激免疫小鼠細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ量比相應(yīng)的對(duì)照小鼠顯著升高。細(xì)胞流式結(jié)果進(jìn)一步確定:經(jīng)肽段PⅡ2、PⅡ5刺激后,免疫小鼠細(xì)胞中IFN-γ和CD4雙陽(yáng)性細(xì)胞百分比較對(duì)照小鼠細(xì)胞顯著升高;經(jīng)肽段PⅠ14、PⅠ17、PⅠ21刺激后,免疫小鼠細(xì)胞中IFN-γ和CD8雙陽(yáng)性細(xì)胞的百分比較對(duì)照小鼠細(xì)胞顯著升高�！窘Y(jié)論】確定了肺炎鏈球菌Psa A蛋白分子的3個(gè)B細(xì)胞線性表位;2個(gè)CD4 T細(xì)胞表位;3個(gè)CD8 T細(xì)胞表位。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;廣州醫(yī)科大學(xué);廣州醫(yī)科大學(xué)形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心;
【關(guān)鍵詞】： 肺炎鏈球菌 表面粘附素A 抗原表位
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81072491) 廣州市高�？萍蓟�(10A173)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)廣泛分布于自然界,普遍粘附于正常人的鼻咽部而為一種條件致病菌[1],當(dāng)宿主免疫力低下時(shí),即導(dǎo)致多種嚴(yán)重感染,甚至死亡[2]。肺炎鏈球菌致病分子機(jī)制復(fù)雜,人體抗感染的免疫機(jī)理仍待闡明;多重耐藥的菌株使臨床抗生素治療效果欠佳[3];

【相似文獻(xiàn)】

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6 本報(bào)記者 李穎;肺炎鏈球菌遇流感病毒危害更大[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

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8 中華醫(yī)學(xué)會(huì)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)主任委員 曾光;秋冬季請(qǐng)呵護(hù)好“呼吸大道”[N];健康報(bào);2010年

9 記者 毛黎;遨游天宇的特殊客[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

10 記者 鄭靈巧;流感繼發(fā)肺炎鏈球菌疾病危害大[N];健康報(bào);2010年

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