本文關(guān)鍵詞：2型登革病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS3的表達(dá)及其相互作用蛋白的純化

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【摘要】：目的構(gòu)建2型登革病毒(DENV2)非結(jié)構(gòu)蛋白3(NS3)與親和標(biāo)簽融合蛋白的表達(dá)質(zhì)粒,串聯(lián)親和純化(TAP)法獲得與NS3相互作用的蛋白。方法根據(jù)DENV2基因序列,設(shè)計(jì)引物;以DENV2 c DNA為模板,PCR擴(kuò)增出NS3基因,經(jīng)酶切后克隆至含有串聯(lián)親和標(biāo)簽(FLAG-StrepⅡ)的哺乳真核表達(dá)載體p CI-SF,獲得重組表達(dá)質(zhì)粒p CI-NS3-SF;將上述重組質(zhì)粒通過(guò)轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)入HEK293T細(xì)胞,Western blot法驗(yàn)證NS3融合蛋白的表達(dá);通過(guò)TAP法分離純化與NS3相互作用的蛋白。結(jié)果成功構(gòu)建了NS3融合蛋白表達(dá)載體,利用TAP系統(tǒng)分離得到與NS3蛋白相互作用的宿主蛋白。結(jié)論串聯(lián)親和純化法可以有效的分離與DENV2 NS3相互作用的細(xì)胞蛋白。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部微生物學(xué)教研室;第二炮兵總醫(yī)院檢驗(yàn)科;第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院輸血科;
【關(guān)鍵詞】： 登革病毒 NS 串聯(lián)親和純化
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31370193)
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： 登革病毒(dengue virus,DENV)是世界范圍內(nèi)流行廣泛和危害最為嚴(yán)重的蚊傳蟲(chóng)媒病毒。DENV屬黃病毒科黃病毒屬,主要傳播媒介是埃及伊蚊和白紋伊蚊,多發(fā)于熱帶及亞熱帶地區(qū)。DENV的血清型為4種,其中2型登革病毒(DENV2)引起的感染最為嚴(yán)重。DENV感染在臨床上主要分為輕型登革熱(De

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本文編號(hào)：670629