本文關(guān)鍵詞：早孕小鼠子宮內(nèi)膜中Dicer基因的表達規(guī)律

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【摘要】：目的： 胚胎著床是一個復(fù)雜精細的生命過程，是決定妊娠是否成功的重要環(huán)節(jié)。對其分子機制的研究一直是近年來生殖醫(yī)學(xué)的熱點，但目前仍未完全明了。隨著對表觀遺傳學(xué)研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)miRNA分子在建立母胎對話，尤其是著床過程中對子宮容受性及胚泡侵入行為起到了調(diào)控作用。miRNAs在體內(nèi)的成熟需要關(guān)鍵酶核酸內(nèi)切酶Dicer的參與。已知Dicer基因在生物體內(nèi)多種生理或病理事件中都發(fā)揮了重要作用。本實驗將Dicer基因作為研究對象，將其在早孕小鼠子宮內(nèi)膜中的表達作為研究目標，以期發(fā)現(xiàn)Dicer基因在妊娠小鼠著床前后的表達規(guī)律，為進一步探討Dicer基因在胚胎著床過程中的發(fā)揮的作用及分子機制提供依據(jù)。 方法： 1.動物模型建立及材料收集：建立未孕、真孕、假孕小鼠模型，收集未孕小鼠、真孕小鼠妊娠1d～7d、假孕小鼠妊娠1d～7d各組的子宮內(nèi)膜組織，于-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?2.總RNA提取及實時熒光定量PCR(RT FQ-PCR)：用Trizol裂解液裂解子宮內(nèi)膜，提取總RNA，然后逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。根據(jù)Dicer mRNA的序列設(shè)計出其對應(yīng)的PCR上下游引物，采用β-actin作為內(nèi)參，檢測各組小鼠子宮內(nèi)膜組織中Dicer mRNA的表達。 3.免疫組織化學(xué)：將收集的子宮內(nèi)膜組織處理后進行石蠟包埋，普通切片，然后進行免疫組化實驗，對各組小鼠子宮內(nèi)膜中Dicer蛋白表達進行定量、定位檢測。 4.蛋白提取及Western Blot：用RIPA裂解液提取各組小鼠子宮內(nèi)膜的總蛋白，BCA定量法測定蛋白濃度。用Western印跡法檢測各組小鼠子宮內(nèi)膜中Dicer蛋白的表達情況。 結(jié)果： 1.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示：在真孕組小鼠中，與妊娠1d（記為d1）相比，d4，d5，d6組Dicer mRNA表達明顯升高，并于d5達到高峰；假孕組小鼠中，與d1相比，d4，d5，，d6，d7四組Dicer mRNA表達也升高，其趨勢與真孕組一致。 2.免疫組化結(jié)果顯示：在未孕小鼠的子宮內(nèi)膜中，Dicer在腔上皮、腺上皮和基質(zhì)細胞中均有少量表達；真孕組小鼠中，小鼠妊娠1d子宮內(nèi)膜基質(zhì)開始出現(xiàn)Dicer的強表達，到d4、d5子宮內(nèi)膜上皮及基質(zhì)均可見Dicer表達增強，d5表達顯著高于d1，且基質(zhì)細胞表達強于上皮，一直持續(xù)到d6、d7子宮內(nèi)膜發(fā)生蛻膜化；假孕組小鼠中，d4至d7Dicer的表達亦明顯增強，d4、d5主要表達于基質(zhì)，d6、d7則主要見于上皮。 3. Western結(jié)果顯示：在小鼠真孕組中，與d1相比，未孕及d2、d3組Dicer蛋白表達量沒有明顯改變，d4、d5、d6、d7表達明顯升高；假孕組的表達與真孕類似，與d1相比，d4、d5、d6組Dicer蛋白表達也升高。 結(jié)論： 1.早孕小鼠妊娠4～6d子宮內(nèi)膜組織中，Dicer mRNA和蛋白的表達量與第一天比較，均有顯著升高。 2.著床前，Dicer蛋白在子宮內(nèi)膜上皮細胞與基質(zhì)細胞中均少量表達，著床窗口期與著床后，Dicer表達量增加，且集中在基質(zhì)細胞中。 3.Dicer在早孕小鼠子宮內(nèi)膜組織中的表達存在時間與空間的差異性，提示它可能參與了著床的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：胚胎著床 子宮內(nèi)膜 Dicer
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R321.3
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-15
• 1 材料15-18
• 2 方法18-23
• 3 結(jié)果23-29
• 4 討論29-32
• 全文總結(jié)32-33
• 參考文獻33-36
• 文獻綜述：Dicer 在生殖活動中的作用36-42
• 參考文獻39-42
• 致謝42-43
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文43-44

【共引文獻】

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本文編號：670544