本文關(guān)鍵詞：金屬離子對(duì)TBt構(gòu)象及其免疫活性的影響

  更多相關(guān)文章： 苦蕎過敏蛋白 光譜學(xué) Cu~(2+) 致敏性 雙抗體夾心ELISA

【摘要】：苦蕎屬于蕎麥栽培種中的一種,由于其特殊的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值逐漸引起人們長(zhǎng)期的關(guān)注,苦蕎含有豐富的黃酮類化合物、酚類化合物、活性蛋白和其他物質(zhì),經(jīng)常食用可預(yù)防和治療心腦血管疾病,降低“三高”、延緩衰老等,被稱為21世紀(jì)人類自己能種植的“靈丹妙藥”,“長(zhǎng)生不老的保健食品”等。但是過敏癥也不斷報(bào)道,食用蕎麥后可能會(huì)引起一系列的過敏反應(yīng),如蕁麻疹,哮喘,嚴(yán)重時(shí)甚至休克,死亡,這是由于苦蕎中的某些過敏成分經(jīng)食用后所引起的。本研究小組先前已經(jīng)分離純化得到分子量為56kDa、34kDa和24kDa的過敏原,用免疫印跡法檢測(cè)到它們能夠同蕎麥過敏患者血清中的IgE特異性結(jié)合,因此研究低過敏性的苦蕎食品是非常必要的。通常,降低過敏蛋白的免疫活性的方法有加熱,調(diào)節(jié)pH,金屬離子,物理輻射等等。本實(shí)驗(yàn)主要從金屬離子與苦蕎過敏蛋白TBt的相互作用進(jìn)行研究。按照前期的方法,本研究首先通過分離、純化得到純度95%以上的過敏蛋白TBt。之后配置不同金屬離子溶液(Cu2+、Mg2+、Ca2+、Ba2+、Ni2+、AL3+),并與TBt以不同比例進(jìn)行混合,待相互作用一段時(shí)間后進(jìn)行熒光光譜分析。結(jié)果表明,在所選的金屬離子中,Cu2+對(duì)TBt的結(jié)構(gòu)和活性有較明顯的影響。進(jìn)一步研究結(jié)果顯示,TBt與Cu2+的結(jié)合位點(diǎn)約為1：1,二者主要以靜電作用力結(jié)合。圓二色光譜探討了Cu2+對(duì)TBt二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響,發(fā)現(xiàn)Cu2+與TBt相互作用后其二級(jí)結(jié)構(gòu)未發(fā)生明顯變化。但Native-PAGE分析和ELISA檢測(cè)均顯示,Cu2+與TBt作用后,可使典型Cupin家族的過敏原TBt由三聚體進(jìn)一步聚合形成部分六聚體,同時(shí)IgG結(jié)合能力有所降低。由此得出Cu2+的加入可以使得TBt形成六聚體,部分抗原決定簇被遮, 擋,導(dǎo)致過敏性有所降低。本實(shí)驗(yàn)結(jié)論為深入研究TBt在植物體內(nèi)的存在狀態(tài)以及蕎麥中特征微量元素Cu2+等對(duì)儲(chǔ)藏蛋白的調(diào)控提供了理論參考和科學(xué)依據(jù)。為了檢測(cè)幾種食品中可能存在有微量的苦蕎過敏蛋白,本實(shí)驗(yàn)采用純化的TBt免疫動(dòng)物制備兔和鼠多克隆抗體,建立雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,雙抗體夾心ELISA試劑盒能夠檢測(cè)到濃度為0.16 μg/mL的TBt,其靈敏性和特異性均比間接性ELISA的檢測(cè)結(jié)果高。
【關(guān)鍵詞】：苦蕎過敏蛋白 光譜學(xué) Cu~(2+) 致敏性 雙抗體夾心ELISA
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要10-11
• ABSTRACT11-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述13-21
• 1.1 過敏反應(yīng)13
• 1.2 食物過敏和食物過敏原13-14
• 1.3 蕎麥過敏蛋白14-15
• 1.4 過敏治療以及降低和消除過敏原的方法15-20
• 1.4.1 熱處理16
• 1.4.2 pH處理16
• 1.4.3 酶處理16-17
• 1.4.4 高壓法17
• 1.4.5 輻射法17
• 1.4.6 金屬離子17-18
• 1.4.7 轉(zhuǎn)基因18-20
• 1.5 本研究的目的和意義20-21
• 第二章 金屬離子與苦蕎過敏蛋白TBt的相互作用21-27
• 2.1 材料與儀器21
• 2.1.1 主要材料與試劑21
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法21-22
• 2.2.1 苦蕎過敏蛋白的分離和純化21
• 2.2.2 熒光光譜分析21-22
• 2.3 結(jié)果22-26
• 2.3.1 TBt的純化22
• 2.3.2 熒光光譜分析結(jié)果22-26
• 2.4 討論26-27
• 第三章 Cu~(2+)對(duì)苦蕎過敏蛋白TBt的結(jié)構(gòu)和免疫活性的影響27-39
• 3.1 材料和儀器27
• 3.1.1 主要材料與試劑27
• 3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備27
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法27-28
• 3.2.1 熒光光譜分析27-28
• 3.2.2 紫外-可見吸收光譜分析28
• 3.2.3 CD光譜分析28
• 3.2.4 Native-PAGE分析28
• 3.2.5 抑制性ELISA和間接性ELISA28
• 3.3 結(jié)果28-37
• 3.3.1 熒光光譜分析結(jié)果28-29
• 3.3.2 猝滅機(jī)理類型29-31
• 3.3.3 結(jié)合常數(shù)及結(jié)合位點(diǎn)數(shù)31
• 3.3.4 作用力類型的確定31-32
• 3.3.5 同步熒光光譜32
• 3.3.6 紫外-可見吸收光譜32-34
• 3.3.7 圓二色光譜分析34
• 3.3.8 Native-PAGE分析34-35
• 3.3.9 抑制性ELISA和間接ELISA檢測(cè)35-37
• 3.4 討論37-39
• 第四章 雙抗體夾心ELISA試劑盒的制備39-45
• 4.1 材料和方法39-40
• 4.1.1 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備39
• 4.1.2 主要材料、試劑及配置39-40
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法40-41
• 4.2.1 苦蕎過敏蛋白的分離和純化40
• 4.2.2 多克隆抗體(鼠抗TBt)的制備40
• 4.2.3 測(cè)定抗血清效價(jià)40-41
• 4.2.4 雙抗體夾心ELISA法41
• 4.2.5 測(cè)定最佳檢測(cè)濃度41
• 4.2.6 食品中苦蕎過敏原的檢測(cè)41
• 4.3 結(jié)果41-43
• 4.3.1 測(cè)定TBt多克隆抗體效價(jià)41
• 4.3.2 雙抗體夾心ELISA法測(cè)定最低檢測(cè)苦蕎過敏蛋白TBt濃度41-43
• 4.3.3 檢測(cè)食品中苦蕎過敏原成分43
• 4.4 討論43-45
• 參考文獻(xiàn)45-53
• 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果53-54
• 致謝54-55
• 個(gè)人簡(jiǎn)況及聯(lián)系方式55-56
• 承諾書56-57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號(hào)：666110