靶向MUC1腫瘤治療性疫苗的制備和功能研究
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【摘要】:目的制備一種能高效激活免疫細胞的腫瘤疫苗,提高免疫細胞殺傷腫瘤細胞的功能。方法同源重組表達含人免疫球蛋白(Ig G)Fc片段的MUC1蛋白作為抗原,并利用DOTAP陽離子脂質(zhì)體包被抗原呈遞給體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的樹突狀細胞(DC),然后用DC細胞激活產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的T細胞,檢測T細胞對腫瘤細胞的殺傷能力。結(jié)果成功構(gòu)建含人免疫球蛋白(Ig G)Fc片段的MUC1蛋白表達載體,經(jīng)大腸桿菌成功表達目的蛋白并純化,經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳驗證得到目的蛋白條帶。抗原蛋白經(jīng)DOTAP陽離子脂質(zhì)體包被,包封率達到97%。包被后的抗原刺激體外培養(yǎng)的免疫細胞,流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)1~40μg/ml抗原制劑均能有效激活產(chǎn)生免疫應(yīng)答,并顯著增加功能性腫瘤殺傷細胞亞群比例,聯(lián)合對腫瘤細胞(MCF-7)殺傷功能分析實驗,10μg/ml疫苗制劑效果最佳,能提高免疫細胞對腫瘤細胞殺傷率45%以上。結(jié)論制備的疫苗制劑能有效被DC細胞捕獲,并激活產(chǎn)生特異性應(yīng)答的功能性腫瘤殺傷細胞,顯著提高了免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷功能。
【作者單位】: 深圳市中聯(lián)生物科技開發(fā)有限公司;深圳市晉百慧生物有限公司;上海道培醫(yī)院檢驗科;
【關(guān)鍵詞】: MUC 腫瘤治療性疫苗 陽離子脂質(zhì)體
【基金】:深圳市海外高層次人才創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)專項資金(KQCX20120806161031208)
【分類號】:R392.12
【正文快照】: 腫瘤細胞表面的抗原多肽能夠有效激活機體的免疫應(yīng)答,其可以通過DC細胞呈遞作用引發(fā)細胞毒性T淋巴細胞(CTL)反應(yīng)[1]。MUC1是由muc1基因表達的一種高糖基化(糖基化大于50%)、高相對分子質(zhì)量(Mr2×105)蛋白,是一種跨膜分子[2-3]。糖基化不完全的MUC1廣泛分布(90%的實體瘤和多種
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