本文關鍵詞：半相合基因效應性T淋巴細胞治療宮頸癌的小鼠模型研究

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【摘要】：目的：本實驗以小鼠宮頸癌U14細胞接種C57BL/6雌鼠，建立小鼠宮頸癌移植瘤模型。體外培養(yǎng)C57BL/6雌鼠及半相合基因鼠CB6F1（BABL/C×C57BL/6的雜交子一代，雌性）來源的效應性T淋巴細胞，作用于荷瘤C57BL/6雌鼠，檢測其對小鼠瘤組織中的STAT3、P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表達的影響，觀察各組小鼠生存期、GVHR的嚴重程度。 探討同源基因或半相合基因效應性T淋巴細胞過繼免疫治療的抗瘤效果，為臨床宮頸癌的治療提供新思路。 方法： 1體外培養(yǎng)小鼠宮頸癌U14細胞，建立C57BL/6小鼠宮頸癌移植瘤模型。 2腫瘤抗原致敏的成熟DC制備：將C57BL/6、CB6F1小鼠骨髓細胞，體外加入rmGM-CSF、rmIL-4、腫瘤抗原裂解液，LPS誘導培養(yǎng)即可得到腫瘤抗原致敏的成熟DC。流式細胞儀分析其CD11c~+、MHC II~+、CD86~+細胞表面分子表達情況。 3效應性T細胞的制備：將C57BL/6、CB6F1小鼠脾細胞，經(jīng)淋巴分離液分離獲得淋巴細胞，尼龍毛柱吸附法收集T淋巴細胞。培養(yǎng)T淋巴細胞2天后，加入腫瘤抗原致敏的成熟DC，培養(yǎng)5天，即可得到效應性T細胞。 4LDH法效應性T細胞體外殺傷實驗:將C57BL/6、CB6F1效應性T細胞與宮頸癌U14細胞以50:1、25:1比例混合，混合8小時后，酶標儀檢測培養(yǎng)液上清中LDH含量，計算效應性T細胞對腫瘤細胞的殺傷率。 5實驗動物分組及治療：將荷瘤小鼠C57BL/6完全隨機分至3組，每組8只。PBS組（A組）：0.5ml PBS鼠尾靜脈注射，每5天1次，共注射3次；同源基因效應性T細胞組（B組）：1×10~6個/0.5ml C57BL/6來源效應性T細胞鼠尾靜脈注射，每5天1次，共注射3次；半相合基因效應性T細胞組（C組）：1×10~6個/0.5ml CB6F1來源效應性T細胞鼠尾靜脈注射，每5天1次，共注射3次。觀察各組小鼠生存期。 6免疫組化SP法檢測荷瘤小鼠C57BL/6腫瘤組織STAT3、P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表達情況，采用圖像分析軟件對免疫組化結果進行分析，用陽性細胞百分比表示其含量。 7HE染色觀察各組小鼠瘤組織壞死情況、肝及小腸的病理改變。 結果： 1背部皮下接種1×10~6U14細胞的C57BL/6小鼠，約7天后肉眼可見接種部位腫塊直徑達0.5cm。 2腫瘤抗原致敏的成熟DC：細胞培養(yǎng)7天后,大部分懸浮生長，，成簇明顯，細胞表面可見毛刺狀突起。流式細胞儀分析其CD11c~+MHC II~+細胞純度為92.4%，CD11c~+CD86~+細胞純度為88.8%。 3LDH法效應性T細胞體外殺傷實驗：效靶比為50:1條件下C57BL/6、CB6F1效應性T細胞對U14細胞殺傷率差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）；效靶比25:1條件下C57BL/6、CB6F1效應性T細胞對U14細胞殺傷率差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 4各組老鼠生存期：A組B組、A組C組小鼠生存期差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），B組C組小鼠生存期差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 5C57BL/6小鼠瘤組織免疫組化結果：A組和C組小鼠相比，瘤組織中STAT3、P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表達量差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。A組和B組小鼠相比，瘤組織中P-STAT3、TGF-β_1表達量差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；瘤組織中STAT3、IFN-γ表達量差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。B組和C組小鼠相比，瘤組織中P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表達量差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；瘤組織中STAT3表達量差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 6HE染色結果：HE染色觀察各種小鼠瘤組織，B組和C組小鼠瘤組織較A組小鼠瘤組織壞死面積大。各組小鼠肝及小腸未見明顯病理變化。 結論： 1在體外實驗中，CB6F1來源的效應性T細胞與C57BL/6來源的效應性T細胞都能夠殺傷小鼠宮頸癌U14細胞，且兩者殺傷率未見統(tǒng)計學差異。 2C57BL/6來源的效應性T細胞過繼免疫治療，拮抗TGF-β_1表達，P-STAT3低表達。 3CB6F1來源的效應性T細胞過繼免疫治療，除拮抗TGF-β_1表達、P-STAT3低表達外，STAT3低表達、IFN-γ高表達。 4C57BL/6、CB6F1來源的效應性T細胞作用于荷瘤C57BL/6小鼠未見明顯GVHR。 5CB6F1來源的效應性T細胞過繼免疫治療與C57BL/6來源的效應性T細胞過繼免疫治療都能夠延長荷瘤C57BL/6小鼠的生存期，且兩者生存期未見統(tǒng)計學差異。
【關鍵詞】：半相合基因 效應性T細胞 宮頸癌 STAT3 P-STAT3 TGF-β1 IFN-γ
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R737.33
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10
• 材料與方法10-17
• 結果17-18
• 附圖18-27
• 附表27-28
• 討論28-31
• 結論31-32
• 參考文獻32-34
• 綜述 腫瘤免疫療法34-44
• 參考文獻40-44
• 致謝44-45
• 個人簡歷45

【共引文獻】

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本文編號：635729