發(fā)布時間：2017-08-07 10:27

  本文關(guān)鍵詞：RACK1過表達和低表達HUVEC細胞系的建立和鑒定

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【摘要】：目的建立有活性的蛋白激酶C受體1(RACK1)過表達和低表達人臍靜脈內(nèi)皮細胞系(HUVEC),為進一步從分子水平研究RACK1在心律失常中的作用機制提供有效手段。方法擴增RACK1基因的全長c DNA序列,并插入p IRES2-EGFP獲得過表達載體p IRES2-EGFP-RACK1;同時,設計合成3對短發(fā)夾結(jié)構(gòu)的互補DNA序列和一對陰性對照序列,亞克隆至p Genesil-1得到相應的干擾載體;脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組體及相應的空質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至HUVEC細胞,經(jīng)G418篩選抗性細胞克隆,qRT-PCR及Western blot鑒定RACK1 mRNA和蛋白的表達。結(jié)果RACK1真核表達載體和RNA干擾載體構(gòu)建成功。重組體經(jīng)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HUVEC 48 h后,經(jīng)G418篩選3周得到細胞抗性克隆,qRT-PCR及Western blot結(jié)果證實了過表達載體和干擾載體能有效的增強和沉默HUVEC細胞中RACK1的表達。結(jié)論成功建立了RACK1過表達和低表達HUVEC細胞系。
【作者單位】： 昆明理工大學生命科學與技術(shù)學院分子病毒實驗室;解放軍昆明總醫(yī)院檢驗科;昆明理工大學附屬醫(yī)院云南省第一人民醫(yī)院檢驗科;云南大學化學科學與工程學院自然資源藥物化學重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： RACK 過表達 RNA干擾 HUVEC細胞系
【基金】：國家自然科學基金(81260248) 云南省應用基礎研究計劃(2011FB216,2011FB217)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 有活性的蛋白激酶C受體1(receptor of activatedC kinase 1,RACK1)屬于Trp-Asp 40(WD-40)重復蛋白家族,其蛋白序列與G蛋白β亞基具有高度同源性[1]。人的RACK1蛋白是由鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白βⅡ[guanine nucleotide binding protein(G-protein),be-ta polypeptide 2-like 1,GN，

本文編號：634176