本文關(guān)鍵詞：RACK1過表達(dá)和低表達(dá)HUVEC細(xì)胞系的建立和鑒定

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【摘要】：目的建立有活性的蛋白激酶C受體1(RACK1)過表達(dá)和低表達(dá)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系(HUVEC),為進(jìn)一步從分子水平研究RACK1在心律失常中的作用機(jī)制提供有效手段。方法擴(kuò)增RACK1基因的全長c DNA序列,并插入p IRES2-EGFP獲得過表達(dá)載體p IRES2-EGFP-RACK1;同時(shí),設(shè)計(jì)合成3對(duì)短發(fā)夾結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)DNA序列和一對(duì)陰性對(duì)照序列,亞克隆至p Genesil-1得到相應(yīng)的干擾載體;脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組體及相應(yīng)的空質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至HUVEC細(xì)胞,經(jīng)G418篩選抗性細(xì)胞克隆,qRT-PCR及Western blot鑒定RACK1 mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果RACK1真核表達(dá)載體和RNA干擾載體構(gòu)建成功。重組體經(jīng)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HUVEC 48 h后,經(jīng)G418篩選3周得到細(xì)胞抗性克隆,qRT-PCR及Western blot結(jié)果證實(shí)了過表達(dá)載體和干擾載體能有效的增強(qiáng)和沉默HUVEC細(xì)胞中RACK1的表達(dá)。結(jié)論成功建立了RACK1過表達(dá)和低表達(dá)HUVEC細(xì)胞系。
【作者單位】： 昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院分子病毒實(shí)驗(yàn)室;解放軍昆明總醫(yī)院檢驗(yàn)科;昆明理工大學(xué)附屬醫(yī)院云南省第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;云南大學(xué)化學(xué)科學(xué)與工程學(xué)院自然資源藥物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： RACK 過表達(dá) RNA干擾 HUVEC細(xì)胞系
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81260248) 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃(2011FB216,2011FB217)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 有活性的蛋白激酶C受體1(receptor of activatedC kinase 1,RACK1)屬于Trp-Asp 40(WD-40)重復(fù)蛋白家族,其蛋白序列與G蛋白β亞基具有高度同源性[1]。人的RACK1蛋白是由鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白βⅡ[guanine nucleotide binding protein(G-protein),be-ta polypeptide 2-like 1,GN，

本文編號(hào)：634176