本文關鍵詞：miRNA-203轉染誘導人表皮干細胞向汗腺細胞分化的研究

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【摘要】：目的探討mi RNA-203轉染誘導人表皮干細胞向汗腺細胞分化的可能性及機制。方法取包皮環(huán)切術獲得的人正常包皮組織5例,采用0.25%胰蛋白酶-EDTA聯(lián)合消化法分離表皮和真皮,應用Ⅳ型膠原差速貼壁法純化人表皮干細胞,倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長狀況,行β1整合素(integrinβ1,ITGB1)、角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)、CK1、CK10、CK18、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)免疫細胞化學染色鑒定。通過脂質體轉染將mi RNA-203模擬物導入人表皮干細胞(實驗組),轉染對照mi RNA模擬物作為對照組。免疫細胞化學染色法對轉染后細胞行ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA單克隆抗體檢測鑒定;實時熒光定量RT-PCR檢測轉染前及轉染后72 h的細胞中mi RNA-203、P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA m RNA相對表達量;Western blot法檢測P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA蛋白相對表達量;并對mi RNA-203的m RNA表達與P63的m RNA和蛋白表達分別行Pearson相關分析。結果轉染前人表皮干細胞CK19、ITGB1陽性表達,轉染后CK1、CK10、CK18、CEA陽性表達。實驗組轉染后細胞mi RNA-203 m RNA相對表達量顯著高于轉染前(P0.05)。實驗組轉染后細胞CK1、CK10、CK18、CEA m RNA及蛋白的相對表達量均高于轉染前及對照組,而P63、CK19、ITGB1 m RNA及蛋白的相對表達量均低于轉染前和對照組,比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。上述指標對照組與轉染前比較差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。轉染前后mi RNA-203的m RNA表達量與P63的m RNA和蛋白相對表達量均成負相關,轉染前相關系數(shù)分別為—0.91(t=3.862,P=0.042)及—0.96(t=5.971,P=0.009);轉染后相關系數(shù)分別為—0.92(t=4.283,P=0.031)及—0.95(t=5.842,P=0.011)。結論 mi RNA-203能誘導人表皮干細胞分化為汗腺細胞,其作用可能是通過靶向抑制P63來實現(xiàn)的。
【作者單位】： 南昌大學第一附屬醫(yī)院心血管科;南昌大學第一附屬醫(yī)院燒傷中心;
【關鍵詞】： 表皮干細胞 汗腺細胞 分化 miRNA- P
【基金】：國家自然科學基金資助項目(30560058;81460293) 江西省科技廳自主設計組裝重點項目(20133BBG70026)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： CK10,CK18,and CEA were detected by real-time fluorescence quantitative RT-PCR before transfected and at 72 hoursafter transfected.The protein relative expressions of P63,ITGB1,CK19,CK1,CK10,CK18,and CEA were detectedby Western blot.The m RNA expression o

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