本文關(guān)鍵詞：miRNA-203轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)人表皮干細(xì)胞向汗腺細(xì)胞分化的研究

  更多相關(guān)文章： 表皮干細(xì)胞 汗腺細(xì)胞 分化 miRNA- P

【摘要】：目的探討mi RNA-203轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)人表皮干細(xì)胞向汗腺細(xì)胞分化的可能性及機(jī)制。方法取包皮環(huán)切術(shù)獲得的人正常包皮組織5例,采用0.25%胰蛋白酶-EDTA聯(lián)合消化法分離表皮和真皮,應(yīng)用Ⅳ型膠原差速貼壁法純化人表皮干細(xì)胞,倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況,行β1整合素(integrinβ1,ITGB1)、角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)、CK1、CK10、CK18、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定。通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染將mi RNA-203模擬物導(dǎo)入人表皮干細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組),轉(zhuǎn)染對(duì)照mi RNA模擬物作為對(duì)照組。免疫細(xì)胞化學(xué)染色法對(duì)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞行ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA單克隆抗體檢測(cè)鑒定;實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染前及轉(zhuǎn)染后72 h的細(xì)胞中mi RNA-203、P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA m RNA相對(duì)表達(dá)量;Western blot法檢測(cè)P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA蛋白相對(duì)表達(dá)量;并對(duì)mi RNA-203的m RNA表達(dá)與P63的m RNA和蛋白表達(dá)分別行Pearson相關(guān)分析。結(jié)果轉(zhuǎn)染前人表皮干細(xì)胞CK19、ITGB1陽(yáng)性表達(dá),轉(zhuǎn)染后CK1、CK10、CK18、CEA陽(yáng)性表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染后細(xì)胞mi RNA-203 m RNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于轉(zhuǎn)染前(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染后細(xì)胞CK1、CK10、CK18、CEA m RNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量均高于轉(zhuǎn)染前及對(duì)照組,而P63、CK19、ITGB1 m RNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量均低于轉(zhuǎn)染前和對(duì)照組,比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。上述指標(biāo)對(duì)照組與轉(zhuǎn)染前比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。轉(zhuǎn)染前后mi RNA-203的m RNA表達(dá)量與P63的m RNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量均成負(fù)相關(guān),轉(zhuǎn)染前相關(guān)系數(shù)分別為—0.91(t=3.862,P=0.042)及—0.96(t=5.971,P=0.009);轉(zhuǎn)染后相關(guān)系數(shù)分別為—0.92(t=4.283,P=0.031)及—0.95(t=5.842,P=0.011)。結(jié)論 mi RNA-203能誘導(dǎo)人表皮干細(xì)胞分化為汗腺細(xì)胞,其作用可能是通過(guò)靶向抑制P63來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
【作者單位】： 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管科;南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院燒傷中心;
【關(guān)鍵詞】： 表皮干細(xì)胞 汗腺細(xì)胞 分化 miRNA- P
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30560058;81460293) 江西省科技廳自主設(shè)計(jì)組裝重點(diǎn)項(xiàng)目(20133BBG70026)~~
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： CK10,CK18,and CEA were detected by real-time fluorescence quantitative RT-PCR before transfected and at 72 hoursafter transfected.The protein relative expressions of P63,ITGB1,CK19,CK1,CK10,CK18,and CEA were detectedby Western blot.The m RNA expression o

【相似文獻(xiàn)】

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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