本文關(guān)鍵詞：ERK5信號(hào)通路在髓核細(xì)胞退變的作用研究

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【摘要】：目的：探索髓核細(xì)胞中ERK5信號(hào)通路的作用，，是否能為退變椎間盤提供潛在的分子治療途徑。 方法：1、從正常椎間盤組織分離髓核細(xì)胞，應(yīng)用免疫組化及免疫熒光的方法檢測(cè)ERK5及P-ERK5在髓核細(xì)胞的表達(dá)，XTT法檢測(cè)不同濃度的BIX02188對(duì)髓核細(xì)胞的細(xì)胞毒性；2、髓核細(xì)胞分組給予不同濃度的BIX02188抑制2小時(shí)后，加入H2O2刺激5分鐘，Westernblot檢測(cè)P-ERK5的表達(dá)；3、髓核細(xì)胞分組：5μM BIX0218組和空白對(duì)照組，48小時(shí)后RT-PCR檢測(cè)Ⅱ型膠原，糖胺多糖，SOX9基因mRNA的表達(dá)；4、髓核細(xì)胞分組：5μMBIX0218組和空白對(duì)照組，48小時(shí)后ELISA法檢測(cè)IL-6、NO、MMP-3、TIMP-1的表達(dá)。 結(jié)果：1、ERK-5、P-ERK5在髓核細(xì)胞的細(xì)胞核及胞漿均有表達(dá)，10μM以下的BIX02188無(wú)細(xì)胞毒性；2、200μM的H2O2能激活髓核細(xì)胞P-ERK5的表達(dá)，BIX02188濃度在3-10μM刺激髓核細(xì)胞能抑制髓核細(xì)胞P-ERK5的表達(dá)；3、抑制髓核細(xì)胞ERK5信號(hào)通路48小時(shí)后Ⅱ型膠原，糖胺多糖，SOX9表達(dá)明顯降低，與空白對(duì)照組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=5,P0.05)；4、抑制髓核細(xì)胞ERK5信號(hào)通路48小時(shí)后NO、IL-6、MMP3表達(dá)增高，與空白對(duì)照組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=5,P0.05)，TIMP-1無(wú)明顯變化。 結(jié)論：1、ERK5及P-ERK5在髓核細(xì)胞的胞核及胞漿中均有表達(dá)；2、抑制ERK5信號(hào)通路后，髓核細(xì)胞Ⅱ型膠原，糖胺多糖，SOX9基因表達(dá)降低；NO、IL-6、MMP3表達(dá)升高，TIMP-1無(wú)明顯變化。
【關(guān)鍵詞】：髓核細(xì)胞 細(xì)胞外調(diào)節(jié)信號(hào)激酶5(ERK5) BIX02188 椎間盤
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 前言8-13
• 第一部分 髓核細(xì)胞的分離，免疫組化檢測(cè) ERK5 及 P-ERK5 在髓核細(xì)胞的表達(dá)，XTT 檢測(cè) BIX02188 的細(xì)胞毒性13-19
• 材料與方法13-19
• 1.1、實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 1.2、實(shí)驗(yàn)方法15-17
• 1.3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-19
• 第二部分 不同濃度的抑制劑 BIX02188 對(duì)髓核細(xì)胞 ERK5 的影響19-25
• 材料與方法19-25
• 2.1 、實(shí)驗(yàn)材料19-21
• 2.2 、實(shí)驗(yàn)方法21-24
• 2.3 、實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-25
• 第三部分 抑制 ERK5 的激活，髓核細(xì)胞Ⅱ型膠原，糖胺多糖和 SOX9 的基因轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)25-29
• 材料與方法25-29
• 3.1 、實(shí)驗(yàn)材料25-26
• 3.2 、實(shí)驗(yàn)方法26-28
• 3.3 、實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-29
• 第四部分 抑制 ERK5 的激活，髓核細(xì)胞細(xì)胞外液中 NO、IL-6、MMP-3、TIMP-1 的檢測(cè)29-37
• 材料與方法29-37
• 4.1 、實(shí)驗(yàn)材料29-32
• 4.2 、實(shí)驗(yàn)方法32-34
• 4.3 、實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-37
• 討論37-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-47
• 附錄47-49
• 縮略詞表49-50
• 在校期間發(fā)表論文50-51
• 致謝51

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 邢孟永;P-p38MAPK和Ⅱ型膠原在退變腰椎間盤組織中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];大理學(xué)院;2012年

2 程勇軍;SOX9基因與人頸椎間盤退變相關(guān)性的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

本文編號(hào)：621920