本文關(guān)鍵詞：Max作用蛋白1-0缺失突變體的構(gòu)建、表達及細胞內(nèi)定位的研究

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【摘要】：目的:構(gòu)建Max作用蛋白1-0(Max interacting protein1-0,Mxi1-0)缺失突變體的真核表達載體并觀察這些突變體在細胞內(nèi)的定位情況,為研究Mxi1-0細胞內(nèi)定位與其功能的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。方法:以野生型Mxi1-0真核表達質(zhì)粒為模板,聚合酶鏈式反應(yīng)擴增出5種類型Mxi1-0缺失突變體的基因片段,克隆至增強綠色熒光蛋白真核表達載體,經(jīng)酶切和測序鑒定后,利用脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠胚胎成纖維細胞株(NIH3T3)。Western blot檢測融合蛋白的表達,熒光顯微鏡下觀察融合蛋白細胞內(nèi)定位情況。結(jié)果:各種Mxi1-0缺失突變體經(jīng)測序鑒定正確后,在NIH3T3中得到表達。免疫熒光結(jié)果表明,脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域(PRD)突變體在細胞質(zhì)和細胞核中均有分布,與Sin3結(jié)合域高度同源結(jié)構(gòu)域(t SID)突變體主要分布于細胞質(zhì),在細胞核中有少量分布;PRD-t SID突變體及△PRD突變體分布于細胞質(zhì),而△PRD-t SID突變體主要分布于細胞核。結(jié)論:成功構(gòu)建了5種人Mxi1-0缺失突變體的真核表達載體,并初步觀察這些突變體在細胞內(nèi)的定位情況,為探尋Mxi1-0在細胞內(nèi)定位機制及功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院臨床分子基因檢測中心;南京醫(yī)科大學生殖醫(yī)學國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 基因表達 Max作用蛋白- 小鼠胚胎成纖維細胞 細胞內(nèi)定位
【基金】：國家自然科學基金項目(81301822) 南京醫(yī)科大學科技發(fā)展基金重點項目(2012NJMU088)
【分類號】：Q78;R3411
【正文快照】： Max作用蛋白1(Max interacting protein 1,Mxi1)是一個腫瘤抑制基因,參與禽骨髓細胞瘤病毒癌基因同源物(c-Myc)功能調(diào)節(jié)[1-3]。其堿性螺旋-環(huán)-螺旋亮氨酸拉鏈(b-HLH-ZIP)結(jié)構(gòu)域和c-Myc競爭結(jié)合MYC關(guān)聯(lián)因子X(Max),抵消c-Myc的促轉(zhuǎn)錄作用。Mxi1的氨基末端有Sin3結(jié)合域(SID),當Mx

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