本文關(guān)鍵詞：一個Fabry病家系的GLA基因突變研究

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【摘要】：目的：分析一個臨床診斷為Fabry病的家系成員及其對照的GLA基因突變位點(diǎn)和突變類型，并對突變基因進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能預(yù)測，初步闡明此突變所致Fabry病的可能機(jī)制，為Fabry病的診斷、治療和遺傳咨詢提供一定理論依據(jù)。 方法：通過調(diào)查問卷詳細(xì)記錄此Fabry病家系成員的臨床資料，包括發(fā)病年齡，發(fā)病癥狀，既往病史，家族史，生活質(zhì)量等。對先證者父女二人及部分家系成員進(jìn)行腦CT、心臟彩超、心電圖、肝腎功能、腹部B超、血常規(guī)、尿常規(guī)、眼部以及一般體格檢查，并用干血片法測定α-半乳糖苷酶A(α-galA)的活性。采集家系成員及正常對照外周靜脈抗凝血，擴(kuò)增GLA基因的7個外顯子及其鄰近區(qū)域，并對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化測序。用Chromas、 clustalx、SeqMan等軟件對測序結(jié)果進(jìn)行比對，確定突變位點(diǎn)。通過HGMD和NCBI數(shù)據(jù)庫檢索，明確該突變是已知突變或己知SNP或是未見報道的新突變。如果為新的突變，在NCBI Homogene網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫檢索，明確發(fā)生改變的氨基酸在不同物種的GLA基因中的保守性，推測該突變的發(fā)生對蛋白質(zhì)造成的可能影響。運(yùn)用DNAStar及SWISS-MODEL網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器，對突變后的GLA基因進(jìn)行蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)及三級結(jié)構(gòu)預(yù)測，初步闡明此Fabry病家系可能的發(fā)病機(jī)制，并進(jìn)一步探討基因型與表現(xiàn)型的關(guān)系。 結(jié)果：該Fabry病家系共有成員26人，13人存在相關(guān)臨床癥狀，3名男性，10名女性。其中3名男性患者發(fā)病較早且較嚴(yán)重。女性患者中僅有兩名患者發(fā)病較重，一名表現(xiàn)為腎臟受累，另一名表現(xiàn)為嚴(yán)重肢端疼痛，其余8名女性患者癥狀相對較輕；對該Fabry病家系的臨床資料分析表明該家系臨床表型為經(jīng)典型。對其GLA基因7個外顯子及其鄰近區(qū)域測序分析發(fā)現(xiàn)該家系共有一個基因突變，位于第5外顯子，突變類型為c.717_718delAA。對該突變基因編碼的蛋白質(zhì)二級及三級結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)現(xiàn)該突變基因編碼為提前終止的截短蛋白，結(jié)構(gòu)功能變化較大，因此c.717_718delAA為該家系的致病突變。在對照人群中發(fā)現(xiàn)了兩個GLA基因突變，一個為位于第三內(nèi)含子的小片段缺失g.7188_7192delCAGCC，另一個為位于第一外顯子的錯義突變G11A，其中G11A為新突變，可能影響α-GalA蛋白質(zhì)的運(yùn)輸和加工，此兩種突變是否為致病突變還有待研究。 結(jié)論：基因突變c.717_718delAA對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能影響較大，這與該家系成員的經(jīng)典型臨床表現(xiàn)相一致，為該Fabry病家系的致病突變；Fabry病家系女性患者臨床癥狀各不相同，酶活性測定具有診斷局限，基因檢測為確診Fabry病的重要方法；GLA基因內(nèi)含子突變g.7188_7192delCAGCC的臨床表型不同于以往報道，，有待進(jìn)一步深入研究；G11A為GLA基因的一個新的突變位點(diǎn)，致病與否有待研究；為提高對Fabry病的認(rèn)識及診斷水平，及其與GLA基因突變的關(guān)系，進(jìn)行準(zhǔn)確的產(chǎn)前診斷與臨床咨詢，提供遺傳學(xué)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：Fabry病 GLA基因 基因突變 基因型 表現(xiàn)型
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3416;R739.5
【目錄】：

• 中文摘要7-8
• ABSTRACT8-9
• 英文縮略詞9-10
• 一 引言10-12
• 二 材料與方法12-19
• 1 材料12-14
• 1.1 標(biāo)本的收集12
• 1.2 主要試劑12
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備12-13
• 1.4 GLA 基因擴(kuò)增引物13
• 1.5 引物工作液配制13-14
• 2 方法14-19
• 2.1 標(biāo)本處理14
• 2.2 外周血 DNA 提取14-15
• 2.3 GLA 基因外顯子 PCR 擴(kuò)增15
• 2.4 瓊脂糖凝膠電泳15-16
• 2.5 PCR 產(chǎn)物純化16
• 2.6 純化后 PCR 產(chǎn)物電泳16
• 2.7 純化后 PCR 產(chǎn)物測序16-17
• 2.8 序列分析17
• 2.9 基因突變性質(zhì)確定17
• 2.10 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測17
• 2.11 限制性內(nèi)切酶酶切分析17-18
• 2.12 α-GalA 酶活性測定18-19
• 三 結(jié)果19-30
• 1 臨床資料分析19-25
• 1.1 Fabry 病家系成員家譜圖19
• 1.2 臨床表現(xiàn)19-25
• 2. 基因突變分析25-28
• 2.1 PCR 擴(kuò)增結(jié)果25-26
• 2.2 PCR 產(chǎn)物測序結(jié)果分析26-27
• 2.3 家系以外發(fā)現(xiàn)的突變27-28
• 3 α-GalA 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測28-30
• 3.1 二級結(jié)構(gòu)預(yù)測28
• 3.2 三級結(jié)構(gòu)預(yù)測28-30
• 四 討論30-38
• 1 Fabry 病的臨床特征30-32
• 1.1 神經(jīng)系統(tǒng)受累30
• 1.2 血管角質(zhì)瘤30
• 1.3 心臟受累30-31
• 1.4 腎臟受累31
• 1.5 腦血管受累31-32
• 2 Fabry 病分子機(jī)制32-34
• 2.1 基因突變32
• 2.2 α-半乳糖苷酶32-33
• 2.3 已知突變33
• 2.4 新突變33-34
• 3 基因型與表現(xiàn)型關(guān)系34
• 4. 篩查診斷34-36
• 4.1 酶活性測定34-35
• 4.2 基因診斷35-36
• 5. 臨床意義36-38
• 5.1 遺傳咨詢36
• 5.2 產(chǎn)前診斷36-37
• 5.3 治療37
• 5.4 篩查37-38
• 五 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述42-47
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 致謝47-48
• 作者簡歷48-49
• 導(dǎo)師評閱表49

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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2 徐蔚海;;隱源性腦梗死的診斷進(jìn)展[J];中國實(shí)用內(nèi)科雜志;2007年01期

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本文編號：616241