本文關(guān)鍵詞：利用TALEN技術(shù)高效敲除金黃地鼠Rag1基因及金黃地鼠γ-干擾素單克隆抗體的初步制備

  更多相關(guān)文章： 金黃地鼠 類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)因子TALEN γ-干擾素 單克隆抗體

【摘要】：金黃地鼠(Golden hamster; Mesocricetus auratus)又稱(chēng)敘利亞地鼠。金黃地鼠已經(jīng)作為感染和疾病模型用于許多研究,它經(jīng)常被用于模擬人疾病在自然條件下的發(fā)生過(guò)程。金黃地鼠相對(duì)于其他嚙齒類(lèi)動(dòng)物相比自然狀態(tài)下腫瘤發(fā)病比率相對(duì)較低,有研究稱(chēng)只有0.5%-17%,因此說(shuō)金黃地鼠是一個(gè)很好的腫瘤模型。重要的是金黃地鼠已經(jīng)被公認(rèn)為是一個(gè)寶貴的模式動(dòng)物用于研究由病毒引起的人類(lèi)疾病。例如布亞病毒(bunyaviruses),沙粒病毒(arenaviruses),蟲(chóng)媒病毒(flaviviruses),漢尼拔病毒(henipaviruses)和SARS冠狀病毒。用金黃地鼠作為一個(gè)評(píng)價(jià)溶腫瘤腺病毒的療效和毒性的腫瘤動(dòng)物模型具有小鼠和大鼠無(wú)法比擬的先天優(yōu)勢(shì)。由于小鼠正常組織不支持人腺病毒復(fù)制,因此,小鼠模型無(wú)法很好的評(píng)價(jià)溶腫瘤腺病毒。而金黃地鼠被美國(guó)FDA認(rèn)為是評(píng)價(jià)溶腫瘤腺病毒標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物模型,金黃地鼠正常組織如肺、肝臟都能支持腺病毒的復(fù)制。 金黃地鼠是近幾年才被大家廣泛接受的一種模式動(dòng)物,基于金黃地鼠的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和抗體還十分的稀少。無(wú)法對(duì)利用金黃地鼠為動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行深入的探討,限制了金黃地鼠的應(yīng)用。因此我們圍繞金黃地鼠動(dòng)物模型的兩個(gè)方面設(shè)計(jì)了實(shí)驗(yàn)。第一,利用新型基因修飾技術(shù)類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)因子敲除金黃地鼠Ragl基因制備免疫缺陷的轉(zhuǎn)基因金黃地鼠。第二,運(yùn)用傳統(tǒng)的單克隆抗體技術(shù)制備金黃地鼠γ-干擾素的單克隆抗體,用于轉(zhuǎn)基因金黃地鼠的相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。 類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)因子(transcription activator-like effectors, TALE)是一種最早在植物病原黃單胞菌中發(fā)現(xiàn)的,可以識(shí)別特異DNA序列的,天然的DNA結(jié)合蛋白。利用其這種特性,通過(guò)和相關(guān)功能性蛋白Fokl的融合表達(dá),可以實(shí)現(xiàn)在體內(nèi)和體外特異的結(jié)合和修飾基因組DNA的目的。Fok1是一個(gè)非特異的核酸內(nèi)切酶,但是只有當(dāng)它形成二聚體時(shí)才能行使內(nèi)切酶的功能。最近幾年,TALEN廣泛應(yīng)用于基因的敲入和敲除,轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型建立,基因治療等方面。 經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn),我們通過(guò)顯微注射把TALEN轉(zhuǎn)錄的mRNA打進(jìn)斑馬魚(yú)和大鼠的受精卵中,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行測(cè)序,在斑馬魚(yú)和大鼠體內(nèi)驗(yàn)證了所設(shè)計(jì)的TALEN的敲除效率,得到了一對(duì)高效TALEN,通過(guò)將此TALEN轉(zhuǎn)錄的mRNA經(jīng)顯微注射進(jìn)斑馬魚(yú)和大鼠受精卵后,在斑馬魚(yú)中驗(yàn)證其效率為17.9%。于此同時(shí)我們通過(guò)原核表達(dá)金黃地鼠Y-干擾素蛋白并用此蛋白免疫小鼠,經(jīng)過(guò)細(xì)胞融合和克隆篩選,也已經(jīng)成功得到5株抗金黃地鼠γ-干擾素的單克隆抗體,并用ELISA和Western Blot的方法進(jìn)行了初步驗(yàn)證。該研究為拓展使用金黃地鼠模型用于醫(yī)學(xué)科學(xué)研究提供了有力的工具。
【關(guān)鍵詞】：金黃地鼠 類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)因子TALEN γ-干擾素 單克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：Q78;R392;R-332
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 第一部分：利用TALEN技術(shù)高效的敲除金黃地鼠Rag1基因9-20
• 1 引言9-11
• 2 實(shí)驗(yàn)所需主要儀器及公司11
• 3 實(shí)驗(yàn)所需試劑及配制11-13
• 4 實(shí)驗(yàn)材料和方法13-16
• 5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-18
• 6 討論18-20
• 第二部分：金黃地鼠γ-干擾素的單克隆抗體的制備20-44
• 1 引言20-22
• 2 實(shí)驗(yàn)所需主要儀器及公司22-23
• 3 試劑23-27
• 4 實(shí)驗(yàn)方法27-36
• 5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-42
• 6 討論42-44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 綜述 新型基因修飾技術(shù)ZFN和TALEN的應(yīng)用46-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 致謝60

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 趙美威;段承俐;劉江;;基于類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物(TALEs)的基因組定點(diǎn)操控技術(shù)[J];動(dòng)物學(xué)研究;2013年05期

2 陳敏;李怡芳;何蓉蓉;栗原博;;干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白抗甲型流感病毒的研究進(jìn)展[J];國(guó)際藥學(xué)研究雜志;2013年06期

3 何華蘭;;TAL效應(yīng)蛋白研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2014年05期

4 陳琳琳;馮抒宇;欒喜梅;焦曄;劉明秋;鄭兆鑫;;家豬Ⅲ型干擾素的生物化學(xué)性質(zhì)與抗病毒能力研究[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年01期

5 楊化強(qiáng);賴(lài)良學(xué);;基因修飾豬作為人類(lèi)疾病模型的研究進(jìn)展[J];科技導(dǎo)報(bào);2011年30期

6 王躍強(qiáng);鄭貴斌;譚安江;黃勇平;;基因組編輯技術(shù)及其在昆蟲(chóng)研究中的應(yīng)用[J];中國(guó)科學(xué):生命科學(xué);2013年12期

7 余寧;李銀聚;程相朝;張春杰;吳庭才;陳慧敏;;雞IL-18復(fù)合免疫增強(qiáng)劑對(duì)雞IFN-γ和IL-2表達(dá)的影響[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年19期

8 吳倫英;景曉輝;沈雁;;類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物及其在生物技術(shù)領(lǐng)域的應(yīng)用[J];熱帶生物學(xué)報(bào);2013年04期

9 CAO Cong;ZHAO GuoWei;YU Wei;XIE XueMin;WANG WenTian;YANG RuiFeng;LV Xiang;LIU DePei;;Activation of STAT3 stimulates AHSP expression in K562 cells[J];Science China(Life Sciences);2014年05期

10 曹聰;趙國(guó)偉;于偉;解學(xué)敏;王文天;楊瑞峰;呂湘;劉德培;;STAT3激活促進(jìn)K562細(xì)胞中AHSP的表達(dá)升高[J];中國(guó)科學(xué):生命科學(xué);2014年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 黃黎珍;李鋒;顧為望;;鋅指介導(dǎo)細(xì)胞基因組的特異性靶向修飾[A];第九屆中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)年會(huì)（2010新疆）論文集[C];2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃黎珍;基因修飾克隆西藏小型豬研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

2 王鑫鑫;SIRT1對(duì)胃癌惡性生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2013年

3 李雷;斑馬魚(yú)AGGF1基因在造血系統(tǒng)以及血管系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中的功能研究[D];華中科技大學(xué);2013年

4 王蓓;EV71拮抗I型干擾素產(chǎn)生的分子機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 葛科立;依賴(lài)hTERT啟動(dòng)子的新型溶瘤單純皰疹病毒的構(gòu)建和功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

6 葛菁;免疫性血小板減少癥遺傳易感性的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

7 許靜;嗜熱四膜蟲(chóng)三種含有鋅指結(jié)構(gòu)域蛋白的功能研究[D];山西大學(xué);2013年

8 劉志國(guó);轉(zhuǎn)基因克隆豬的研制與ZFNs介導(dǎo)基因敲除的初步研究[D];中山大學(xué);2013年

9 張亞文;Jak2的缺失通過(guò)減弱Raf-1/MEK1/Sp-1信號(hào)通路并eNOS及STAT活性損傷內(nèi)皮功能[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

10 程敏;干擾素調(diào)節(jié)的miRNA表達(dá)譜及其抗HCV機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 趙麗華;肌肉生長(zhǎng)抑制素基因敲除肉牛的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2011年

2 張燕;轉(zhuǎn)sfat-1基因乳腺上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

3 上官陶;Lysostaphin乳腺表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因細(xì)胞制備[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

4 王琳琳;BDNFrs6265基因多態(tài)性與農(nóng)村自殺未遂行為的關(guān)聯(lián)性研究[D];山東大學(xué);2013年

5 張圣欞;TALEN介導(dǎo)的家蠶基因組編輯研究[D];西南大學(xué);2013年

6 喬紅秀;病毒及質(zhì)粒DNA刺激后小鼠肌細(xì)胞內(nèi)IFN-β與PD-L1的表達(dá)情況[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

7 陳宜曉;干擾素調(diào)節(jié)因子新剪接異構(gòu)體IRF7-e的結(jié)構(gòu)及功能[D];蘇州大學(xué);2013年

8 云亭;利用鋅指核酶技術(shù)制備MSTN基因敲除的牛胎兒成纖維細(xì)胞[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

9 史玉葉;干擾素-α聯(lián)合高三尖杉酯堿對(duì)K562細(xì)胞增殖和β-catenin表達(dá)的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

10 袁森;流感病毒NS蛋白對(duì)干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白表達(dá)的影響研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：614802