本文關(guān)鍵詞：耐藥性嗜麥芽窄食單胞菌和綠膿桿菌噬菌體初步應(yīng)用研究

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【摘要】：目的：嗜麥芽窄食單胞菌是一種常見的條件致病菌,由于其能定殖在呼吸道上皮細胞和醫(yī)療設(shè)備表面使其很容易感染免疫力低下患者,嗜麥芽窄食單胞菌所導(dǎo)致的感染以呼吸道感染最為常見。銅綠假單胞桿菌也是臨床上最常見的條件致病菌之一,兩類細菌對多類抗生素具有固有耐藥性,它們的院內(nèi)感染對人類健康特別是免疫力低下患者造成重大威脅。 本研究就目前嗜麥芽窄食單胞菌和銅綠假單胞桿菌的嚴重耐藥性現(xiàn)狀,分別利用臨床分離的多重耐藥嗜麥芽窄食單胞菌SMA2和銅綠假單胞桿菌Pa44,從醫(yī)院污水中分離到可裂解SMA2的噬菌體IME13、IME15以及Pa44的噬菌體Pa27P1,分析它們的生物學(xué)特性,并構(gòu)建SMA2免疫抑制Balb/c小鼠肺部感染治療模型、Pa44腹腔感染小鼠模型及其治療模型。 方法：以臨床分離的耐藥性嗜麥芽窄食單胞菌SMA2和銅綠假單胞桿菌Pa44為指示菌,利用噬斑法從醫(yī)院污水中分離噬菌體；利用雙層平板培養(yǎng)法測定噬菌體效價、最佳感染復(fù)數(shù)及一步生長曲線等生物學(xué)特性；蛋白酶K/SDS法提取噬菌體IME13、IME15基因組并用454測序儀測定噬菌體全基因組序列。 用滴鼻法給小鼠肺部感染最小致死量的嗜麥芽窄食單胞菌SMA2,感染后分別用嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體IME13、IME15經(jīng)滴鼻方式進行治療,記錄小鼠死亡率和噬菌體的治療效果。利用腹腔注射的方法建立小鼠的銅綠假單胞桿菌Pa44全身感染模型。應(yīng)用篩選出的噬菌體Pa27P1分不同時間點和不同治療劑量經(jīng)腹腔注射對腹腔感染耐藥性銅綠假單胞菌Pa44的Balb/c小鼠進行治療,觀察噬菌體的治療效果。 結(jié)果：成功分離出2株嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體IME13、IME15,其中IME13具有獨特的噬斑形態(tài)和多達3100的爆發(fā)量,IME15是第一株T7類嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體；成功分離出銅綠假單胞桿菌噬菌體近90株,并篩選出5株相對廣譜的Pa3P1、Pa4P5、Pa12P1、Pa20P5和Pa28P2,這五株噬菌體的組合在體外能裂解所有18株銅綠假單胞桿菌。 動物實驗表明噬菌體IME13和IME15對于嗜麥芽窄食單胞菌SMA2導(dǎo)致的肺部感染具有較好的治療效果,噬菌體Pa27P1對于銅綠假單胞桿菌Pa44導(dǎo)致的全身感染和肺部感染具有較好的治療效果,在感染后及時進行噬菌體治療對于降低小鼠死亡率有一定意義。結(jié)論：隨著嗜麥芽窄食單胞菌和銅綠假單胞桿菌耐藥性和對免疫抑制患者的致病性日趨嚴重,積極探索不依賴抗生素的治療方法勢在必行。研究結(jié)果表明利用醫(yī)院廢水分離噬菌體并用于治療細菌感染性疾病的方法是可行的,有望為細菌感染的抗生素替代療法奠定基礎(chǔ)。圖11幅,表4個,參考文獻43篇。
【關(guān)鍵詞】：嗜麥芽窄食單胞菌 銅綠假單胞桿菌 細菌耐藥性 噬菌體 生物學(xué)特性 全基因組測序 噬菌體治療
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R378
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-11
• 符號說明11-12
• 1 緒論12-18
• 1.1 噬菌體及噬菌體治療12-14
• 1.1.1 噬菌體簡介12-14
• 1.1.2 活噬菌體用于細菌性疾病的治療14
• 1.2 嗜麥芽窄食單胞菌及其耐藥現(xiàn)狀14-15
• 1.2.1 嗜麥芽窄食單胞菌概述14-15
• 1.2.2 嗜麥芽窄食單胞菌致病性及耐藥性現(xiàn)狀15
• 1.3 銅綠假單胞桿菌及其耐藥現(xiàn)狀15-17
• 1.3.1 銅綠假單胞桿菌概述15-16
• 1.3.2 銅綠假單胞桿菌致病性和耐藥性16-17
• 1.4 本文研究內(nèi)容17-18
• 2 嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體的分離、鑒定與生物學(xué)特性研究18-30
• 2.1 材料與方法18-23
• 2.1.1 供試菌株18
• 2.1.2 培養(yǎng)基及試劑18
• 2.1.3 嗜麥芽窄食單胞菌SMA2的16S rRNA種屬鑒定18-19
• 2.1.4 PCR產(chǎn)物純化19
• 2.1.5 嗜麥芽窄食單胞菌SMA2耐藥譜鑒定19
• 2.1.6 嗜麥芽窄食單胞菌SMA2噬菌體的分離19-20
• 2.1.7 嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體IME13、IME15的生物學(xué)特性研究20-23
• 2.1.8 噬菌體IME13、IME15的全基因組測序23
• 2.2 結(jié)果23-28
• 2.2.1 嗜麥芽窄食單胞菌SMA2的種屬鑒定結(jié)果23-24
• 2.2.2 嗜麥芽窄食單胞菌SMA2的耐藥譜鑒定結(jié)果24
• 2.2.3 嗜麥芽窄食單胞菌SMA2的噬菌體分離結(jié)果24-25
• 2.2.4 噬菌體IME13、IME15最佳感染復(fù)數(shù)的測定結(jié)果25
• 2.2.5 IME13和IME15一步生長曲線25-28
• 2.3 討論28-30
• 3 嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體治療肺部感染小鼠模型30-35
• 3.1 引言30
• 3.2 材料與方法30
• 3.2.1 菌株、噬菌體、培養(yǎng)基及試劑30
• 3.2.2 實驗動物30
• 3.3 最小致死量的測定30-31
• 3.3.1 菌液制備30-31
• 3.3.2 免疫抑制動物感染實驗31
• 3.3.3 感染模型指標評價31
• 3.4 噬菌體IME13、IMEl 5治療SMA2肺部感染的初步探索31-32
• 3.4.1 菌液制備31
• 3.4.2 免疫抑制動物感染治療實驗31-32
• 3.4.3 治療模型評價指標32
• 3.5 結(jié)果32-33
• 3.5.1 嗜麥芽窄食單胞菌SMA2肺部感染Balb/c小鼠模型的建立32
• 3.5.2 噬菌體治療效果的初步研究32-33
• 3.6 討論33-35
• 4 綠膿桿菌噬菌體的分離、鑒定與生物學(xué)特性研究35-46
• 4.1 材料與方法35-39
• 4.1.1 供試菌株和質(zhì)粒35
• 4.1.2 培養(yǎng)基及試劑35
• 4.1.3 綠膿桿菌噬菌體的大規(guī)模分離35-36
• 4.1.4 銅綠假單胞桿菌Pa44的16S rRNA鑒定36
• 4.1.5 PCR產(chǎn)物純化36-37
• 4.1.6 銅綠假單胞桿菌Pa44的耐藥譜鑒定37
• 4.1.7 噬菌體Pa27P1的生物學(xué)特性研究37-39
• 4.2 結(jié)果39-44
• 4.2.1 噬菌體的分離及其宿主范圍39-41
• 4.2.2 銅綠假單胞桿菌Pa44的16S rRNA鑒定41-42
• 4.2.3 銅綠假單胞桿菌Pa44的耐藥譜鑒定42-43
• 4.2.4 噬菌體Pa27P1最佳感染復(fù)數(shù)的測定結(jié)果43
• 4.2.5 噬菌體Pa27P1一步生長曲線43-44
• 4.3 討論44-46
• 5 銅綠假單胞桿菌噬菌體Pa27P1治療全身感染小鼠模型46-51
• 5.1 材料與方法46
• 5.1.1 菌株、噬菌體、培養(yǎng)基及試劑46
• 5.1.2 實驗動物46
• 5.2 最小致死量的測定46-47
• 5.2.1 菌液制備46
• 5.2.2 動物腹腔感染實驗46-47
• 5.2.3 腹腔感染模型評價指標47
• 5.3 噬菌體Pa27P1治療Pa44全身感染的初步探索47-48
• 5.3.1 菌液和噬菌體制備47
• 5.3.2 噬菌體Pa27P1治療Pa44腹腔感染最佳治療劑量的研究47
• 5.3.3 噬菌體Pa27P1治療Pa44腹腔感染最佳治療時間的研究47-48
• 5.3.4 治療模型評價指標48
• 5.4 結(jié)果48-49
• 5.4.1 銅綠假單胞桿菌Pa44全身感染Balb/c小鼠模型的建立48
• 5.4.2 噬菌體Pa27P1治療Pa44腹腔感染最佳治療劑量的研究結(jié)果48-49
• 5.4.3 噬菌體Pa27P1治療Pa44腹腔感染最佳治療時間的研究結(jié)果49
• 5.5 討論49-51
• 參考文獻51-55
• 綜述55-63
• 參考文獻60-63
• 主要溶液的配制63-65
• 主要儀器65-66
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文66-67
• 致謝67

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 卓志娟;姚莉娟;;重癥監(jiān)護病房內(nèi)嗜麥芽窄食單胞菌醫(yī)院感染肺炎的臨床及耐藥性研究[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2010年05期

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3 肖永紅;王進;朱燕;齊惠敏;李湘燕;趙彩云;侯芳;鄭波;高磊;郝鳳蘭;薛峰;;Mohnarin 2008年度全國細菌耐藥監(jiān)測[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2010年16期

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本文編號：613064