發(fā)布時間：2017-08-01 15:25

  本文關(guān)鍵詞：膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎（CIA）恒河猴模型及藥物治療

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【摘要】：本項研究主要分為兩個部分：第一部分，用牛II型膠原誘導(dǎo)恒河猴關(guān)節(jié)炎模型的建立；第二部分，采用已上市且在臨床上已驗證具有治療類風濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis，RA）作用的藥物西樂葆（CELEBREX，塞來昔布膠囊）和益賽普（ETANERCEP，注射用重組人II型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白）來驗證膠原誘導(dǎo)恒河猴關(guān)節(jié)炎模型是否可用于RA治療藥物的評價。 第一部分牛II型膠原誘導(dǎo)恒河猴關(guān)節(jié)炎模型的建立 目的：采用牛II型膠原誘導(dǎo)建立恒河猴關(guān)節(jié)炎模型。方法：采用完全弗氏佐劑制備的牛II型膠原懸濁液免疫6只恒河猴，每周測定動物的血液學和生化學指標，采用半定量評分系統(tǒng)觀察動物的體重及行為學狀態(tài)并評分，X線檢查骨關(guān)節(jié)病變程度。結(jié)果：注射膠原后12-15天（D12-D15），恒河猴均出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎癥表現(xiàn)，背部注射部位皮膚潰爛出血，臨床表現(xiàn)為采食速度減慢，體重下降率超過14%或者呈增長緩慢、雙足行為異常。動物表現(xiàn)分為：①2/6只動物在免疫后第一周到第二周發(fā)展成急性活動期關(guān)節(jié)炎（全身臨床評分3-4分），病程發(fā)展迅速，行動遲緩且不喜攀爬繼而指關(guān)節(jié)紅腫，血清中CRP、WBC、NEUT、MONO和抗II型膠原IgG水平顯著或極顯著升高(P≤0.05或P≤0.01)，HGB、ALB顯著降低，D26-D40關(guān)節(jié)嚴重腫脹，動物食欲廢絕；②4/6只動物屬于慢性活動期，病程呈慢性進行性發(fā)展，全身臨床評分維持2-3分。在免疫后70天觀察期間，CRP、WBC、NEUT、 MONO輕度升高，血清抗II型膠原IgG水平顯著升高(P≤0.05)。Ｘ線征象與臨床RA相似，雙手和雙足掌指關(guān)節(jié)（MCP）/跖趾關(guān)節(jié)和近段指關(guān)節(jié)（PIP）/近段趾關(guān)節(jié)出現(xiàn)初期或中期病變特征，表現(xiàn)為受累關(guān)節(jié)周圍軟組織腫脹、局限性骨質(zhì)疏松、關(guān)節(jié)間隙狹窄和骨質(zhì)侵蝕以關(guān)節(jié)邊緣骨質(zhì)侵蝕最具有特異性，病變以手或足遠端、近端指間關(guān)節(jié)為主，其中雙足關(guān)節(jié)破壞先于雙手關(guān)節(jié)。結(jié)論：膠原誘導(dǎo)恒河猴關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制和表現(xiàn)與臨床相似。 第二部分西樂葆、益賽普對膠原誘導(dǎo)恒河猴關(guān)節(jié)炎的治療。 目的：驗證西樂葆、益賽普對膠原誘導(dǎo)恒河猴關(guān)節(jié)炎的治療作用。 方法：對3只RA模型動物（1/3只急性活動期動物，2/3只慢性活動期動物）在免疫后第四周開始用西樂葆（9mg kg-1，1次/天，po.）治療；對5只RA模型動物在膠原免疫后D26皮下注射益賽普（1mg kg-1，2次/周，sc.）。6只動物作為模型對照組觀察，免疫后每周檢測動物的生化學指標的變化，，采用半定量評分系統(tǒng)動態(tài)監(jiān)測動物的體重及行為狀態(tài)并評分；給藥前和給藥結(jié)束分別檢測：X線檢查骨關(guān)節(jié)病變程度，血清細胞因子TNF-α、IFN-γ的變化，血清中抗牛II型膠原IgG的變化。 結(jié)果：西樂葆（9mg kg-1）連續(xù)給藥30天治療3只活動性RA猴，對炎癥控制起效較慢，連續(xù)給藥D16-D30可抑制CRP、WBC、NEUT升高，同時緩解ALB、HGB降低；X線表明可使受累關(guān)節(jié)局部軟組織腫脹緩解（3/3），但對骨保護方面的作用不明顯，特別是雙足骨破壞繼續(xù)發(fā)展（3/3）。 益賽普（1mg kg-1）治療5只急性活動期RA猴，在給藥兩周后（共四針），動物體重出現(xiàn)較大的反彈，生化指標逐漸恢復(fù)；在給藥D20（第5針），4/5只動物由于免疫低下繼發(fā)感染出現(xiàn)炎性細胞升高，停藥后給予西樂葆（9mg kg-1，1次/天，治療13天），動物體重呈增長趨勢（臨床評分降低至1~2分），同時MONO呈降低趨勢，但WBC、NEUT持續(xù)保持高水平。與給藥前四肢關(guān)節(jié)的X光平片比較，動物關(guān)節(jié)軟組織腫脹改善明顯，5/5只動物的關(guān)節(jié)面骨質(zhì)損傷發(fā)展不明顯。 結(jié)論：西樂葆可以控制膠原誘導(dǎo)恒河猴關(guān)節(jié)炎的炎癥發(fā)展，但其對關(guān)節(jié)面的骨損害沒有保護作用且療效的產(chǎn)生較為緩慢，關(guān)節(jié)炎癥狀的明顯改善出現(xiàn)在給藥一個月左右。益賽普可以控制中度或重度的關(guān)節(jié)炎癥狀，對關(guān)節(jié)面的損害有減緩作用，療效產(chǎn)生的時程短，給藥兩周后動物的癥狀得到了明顯改善。
【關(guān)鍵詞】：膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎 恒河猴 生化指標X光平片 西樂葆 益賽普
【學位授予單位】：四川抗菌素工業(yè)研究所
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R684.3;R-332
【目錄】：

• 摘要7-10
• Abstract10-14
• 前言14-17
• 一、牛 II 型膠原誘導(dǎo)恒河猴關(guān)節(jié)炎的研究17-31
• 1 引言17
• 2 材料17-19
• 2.1 動物17-18
• 2.2 試劑18
• 2.2.1 試劑一18
• 2.2.2 試劑二18
• 2.2.3 試劑三18
• 2.2.4 ELISA 試劑盒18
• 2.3 其他材料18-19
• 2.4 儀器19
• 3 方法19-22
• 3.1 懸濁液準備與動物免疫19
• 3.2 免疫后的臨床評分19-20
• 3.3 血液學與血清生化測定20
• 3.4 關(guān)節(jié)組織病理學檢查20
• 3.5 血清抗牛 II 型膠原 IgG 測定20-22
• 4 結(jié)果22-29
• 4.1 免疫后體重與臨床相關(guān)性評分分析22-25
• 4.2 血生化指標分析25-26
• 4.3 病理學檢查結(jié)果26-27
• 4.4 X 線照片診斷27-28
• 4.5 抗牛 II 型膠原 IgG 測定結(jié)果28-29
• 5 討論29-31
• 二、西樂葆、益賽普對 CIA 恒河猴模型臨床特征改變的試驗研究31-48
• 1 引言31-32
• 2 材料32-33
• 2.1 動物32
• 2.2 藥物32
• 2.3 其他試劑32-33
• 2.4 儀器33
• 3 方法33-37
• 3.1 模型建立33-34
• 3.1.1 制備和免疫方法33
• 3.1.2 致炎后的動物入選標準33-34
• 3.2 給藥方案34
• 3.3 各種指標的檢查與頻率34-36
• 3.3.1 臨床癥狀的觀察34
• 3.3.2 注射部位的觀察34-35
• 3.3.3 體重測定35
• 3.3.4 攝食量測定35
• 3.3.5 四肢關(guān)節(jié)檢查35
• 3.3.6 X 線照片診斷35-36
• 3.4 細胞因子試驗36-37
• 3.4.1 血清 TNF-α含量測定36-37
• 3.4.2 血清 IFN-γ含量測定37
• 3.5 數(shù)據(jù)處理37
• 4 結(jié)果37-47
• 4.1 體重與臨床評分相關(guān)性分析37-40
• 4.2 與炎癥相關(guān)的血液學指標分析40-42
• 4.3 CRP 水平變化42-43
• 4.4 ALB 與 HGB 水平的變化43-44
• 4.5 X 線平片診斷結(jié)果44-45
• 4.6 西樂葆、益賽普對 IFN-γ、 TNF-α和抗牛 II 型膠原 IgG 的影響45-47
• 5 討論47-48
• 結(jié)論48-49
• 試驗創(chuàng)新性49-50
• 附錄：實驗原始數(shù)據(jù)列表50-51
• 附圖51-53
• 參考文獻53-55
• 致謝55-56
• 作者在讀期間科研成果簡介56-57
• 綜述57-66
• 參考文獻64-66
• 中英文縮略詞66

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本文編號：604913