發(fā)布時(shí)間：2017-08-01 14:23

  本文關(guān)鍵詞：L型變異對(duì)結(jié)核分枝桿菌耐藥性的影響及茜草素抗菌作用的研究

  更多相關(guān)文章： 結(jié)核分枝桿菌 L型 表型變異 茜草素

【摘要】：目的建立結(jié)核分枝桿菌L型的誘導(dǎo)模型,觀察L型變異對(duì)結(jié)核分枝桿菌耐藥性的影響。綜合評(píng)估中藥茜草素對(duì)結(jié)核分枝桿菌L型的作用,為開(kāi)發(fā)新型抗結(jié)核中藥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法①通過(guò)3種不同濃度的藥物與3種結(jié)核分枝桿菌L型培養(yǎng)基進(jìn)行組合,將結(jié)核分枝桿菌細(xì)菌型誘導(dǎo)為L(zhǎng)型菌株；②分離臨床標(biāo)本中的結(jié)核分枝桿菌L型菌株；③通過(guò)抗酸染色、熒光染色、電鏡檢查、結(jié)核抗原檢測(cè)及基因檢測(cè)方法鑒別誘導(dǎo)和臨床分離的結(jié)核分枝桿菌L型菌株；④配制含一線抗結(jié)核藥物的藥敏培養(yǎng)基和茜草素藥敏培養(yǎng)基；⑤將結(jié)核分枝桿菌L型接種于含一線抗結(jié)核藥物培養(yǎng)基及培養(yǎng)；⑥對(duì)誘導(dǎo)和臨床分離的結(jié)核分枝桿菌L型菌株進(jìn)行DNA提取及相關(guān)耐藥基因測(cè)序,并分析其與結(jié)核分枝桿菌L型表型變異的聯(lián)系；⑦將結(jié)核分枝桿菌L型接種于茜草素藥敏培養(yǎng)基及培養(yǎng),觀察中藥茜草素對(duì)結(jié)核分枝桿菌L型的作用。 結(jié)果①成功建立結(jié)核分枝桿菌L型的誘導(dǎo)模型,以含2.5μg/ml的異煙肼在92-3TB-L液體培養(yǎng)基中誘導(dǎo)結(jié)核分枝桿菌L型的效果最佳；②結(jié)核分枝桿菌L型的表型變異可以造成結(jié)核分枝桿菌的耐藥性,誘導(dǎo)的結(jié)核分枝桿菌L型在基因序列未改變的情況下對(duì)異煙肼、利福平、乙胺丁醇和鏈霉素耐藥；③茜草素在藥物濃度為640μg/ml,對(duì)結(jié)核分枝桿菌L型有明顯的抑菌作用。 結(jié)論結(jié)核分枝桿菌L型的表型變異與其耐藥性有一定的聯(lián)系,中藥茜草素在體外對(duì)結(jié)核分枝桿菌有明顯的抑菌作用。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 L型 表型變異 茜草素
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R378.911
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-10
• 第一部分 L型變異對(duì)結(jié)核分枝桿菌耐藥性的影響10-29
• 一、材料與方法10-20
• (一) 實(shí)驗(yàn)菌株10
• (二) 實(shí)驗(yàn)器材10-11
• (三) 試劑與培養(yǎng)基11-14
• 1. 實(shí)驗(yàn)試劑11-12
• 2. 結(jié)核分枝桿菌L型92-3 TB-L液體培養(yǎng)基12
• 3. 結(jié)核分枝桿菌細(xì)菌型92-3 TB液體培養(yǎng)基12-13
• 4. 結(jié)核分枝桿菌L型TAS-L培養(yǎng)基13
• 5. 結(jié)核分枝桿菌L型Dubos肉湯培養(yǎng)基13
• 6. 結(jié)核分枝桿菌L型誘導(dǎo)液的配制13-14
• 7. 92.3 TB-L固體西藥藥敏培養(yǎng)基14
• 8. 50 ×TAE Buffer14
• (四) 實(shí)驗(yàn)方法14-20
• 1. 標(biāo)準(zhǔn)菌株的接種與誘導(dǎo)14-15
• 2. 臨床標(biāo)本處理15
• 3. 結(jié)核菌L型的鑒定15-16
• 4. 結(jié)核菌的耐藥性檢測(cè)16-18
• 5. 結(jié)核菌耐藥基因測(cè)序18-20
• 二、結(jié)果20-25
• (一) 誘導(dǎo)后的結(jié)核菌L型菌株20-21
• (二) 臨床分離的結(jié)核菌L型菌株21-22
• (三) 結(jié)核菌L型對(duì)抗結(jié)核西藥的耐藥性22
• (四) 基因測(cè)序結(jié)果22-25
• 1. DNA提取22-23
• 2. 測(cè)序結(jié)果23-25
• 三、分析與討論25-28
• (一) 結(jié)核菌L型的形成機(jī)制25-26
• (二) 結(jié)核菌L型的生理特性及致病性26-27
• (三) 結(jié)核菌L型變異對(duì)其耐藥性的影響27-28
• 四、小節(jié)28-29
• 第二部分 中藥茜草素對(duì)結(jié)核菌L型作用的實(shí)驗(yàn)研究29-38
• 一、材料與方法29-32
• (一) 實(shí)驗(yàn)菌株29
• (二) 實(shí)驗(yàn)器材29-30
• (三) 試劑與培養(yǎng)基30-32
• 1. 實(shí)驗(yàn)試劑30-31
• 2. 凍存液配制31
• 3. 含茜草素的92-3 TB-L固體藥敏培養(yǎng)基的制備31-32
• (四) 實(shí)驗(yàn)方法32
• 1. 菌懸液制備32
• 2. 茜草素含藥培養(yǎng)基的配制及結(jié)核菌L型菌株的接種32
• 二、結(jié)果32-33
• 三、分析與討論33-37
• (一) 茜草的化學(xué)成分及生物活性33-36
• 1. 主要化學(xué)成分33-35
• 2. 茜草的生物活性35-36
• (二) 茜草及其水提液在體外抗菌活性36
• (三) 茜草素對(duì)結(jié)核菌L型的作用36-37
• 四、小節(jié)37-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 附表44-45
• 致謝45-46
• 文獻(xiàn)綜述46-52
• 參考文獻(xiàn)51-52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 宋文剛;孔祥宇;韓中波;崔新穎;王麗;;茜草素在體外抗菌活性的研究[J];中國(guó)地方病防治雜志;2007年01期

2 ;茜草中兩種萘醌[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(中醫(yī)中藥分冊(cè));1994年01期

3 孫備;茜草提取物對(duì)由四氯化碳和對(duì)乙酰氨基酚所致的肝毒性的作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(中醫(yī)中藥分冊(cè));1996年05期

4 樊中心;茜草中的抗癌成分[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(中醫(yī)中藥分冊(cè));1997年04期

5 L.Michailova;V. Kussovski;T Radoucheva;M.Jordanova;W.Berget;H.Rinder;N.Markova;張宗德;張立興;;結(jié)核分枝桿菌“不均一耐藥株”的形態(tài)學(xué)變異及細(xì)胞壁缺陷[J];國(guó)際結(jié)核病與肺部疾病雜志(中文版);2006年02期

6 W.W.Yew;徐彩紅;何廣學(xué);;結(jié)核分枝桿菌耐藥機(jī)制[J];國(guó)際結(jié)核病與肺部疾病雜志(中文版);2009年04期

7 許蘭芝,陳維寧,張薇,高爾,陶秀英;茜草醇提物的抗炎免疫作用[J];濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年01期

8 羅獻(xiàn)瑞;中國(guó)茜草科資料(五)[J];熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào);1999年01期

9 王素賢,華會(huì)明,吳立軍,李銑,朱廷儒;茜草中新蒽醌甙的結(jié)構(gòu)鑒定[J];沈陽(yáng)藥學(xué)院學(xué)報(bào);1991年03期

10 馮江,黃鵬,周建民;100種中藥材中有害元素鉛鎘砷的測(cè)定和意義[J];微量元素與健康研究;2001年02期

，

本文編號(hào)：604693