發(fā)布時間：2017-08-01 14:20

  本文關(guān)鍵詞：豬孤雌胚胎來源單倍體細胞的研究

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【摘要】：哺乳動物單倍體細胞系可以為基因功能研究和轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)提供有力的工具。為了得到豬單倍體細胞,本研究主要進行了三組實驗。首先我們利用染色體核型分析技術(shù)檢測了豬早期(8細胞到16細胞)孤雌胚胎的基因組完整性。所分析的總共81個卵裂球染色體中期相中48.15%為遺傳完整的單倍體細胞�；谝陨蠈嶒灲Y(jié)果的支持,兩種主流的獲得大量單倍體細胞的技術(shù)被應(yīng)用到了本實驗中,包括利用孤雌激活的卵母細胞得到類胚胎干細胞和建立孤雌胎兒成纖維細胞系�？偣步⒘肆鶄�孤雌胚胎類胚胎干細胞系。通過染色體分析,在這六個細胞系中沒有觀察到包含有19條染色體的豬單倍體細胞。其中的四個細胞系主要由多于38條染色體的多整倍體細胞組成�？偣步⒘�28個豬孤雌胎兒細胞系,染色體分析顯示其主要細胞類型為19到38條染色體的非整倍體(59.48-60.91%),二倍體細胞也占有較高的比率(16.17%-22.73%),明顯不同于豬孤雌類胚胎干細胞系。在27%的豬孤雌胎兒成纖維細胞系中觀察到了低比例的單倍體細胞(3.4%-8.3%)。但是這些細胞都不是真正的單倍體細胞,雖然都含有19條染色體,但都存在染色體的隨機丟失與補充。通過流式細胞篩選獲得很低的單倍體細胞富集效率(5.63%,5.97%)和較高的二倍體細胞富集效率(86.36%,89.06%)。富集之后的二倍體細胞呈正常的二倍體核型,經(jīng)基因芯片檢測父源印記基因表達水平極低。 綜合上述結(jié)果可見：從豬早期孤雌胚胎可以得到少量的真正的單倍體細胞。體外培養(yǎng)豬孤雌胚胎得到的類胚胎干細胞和通過分離體內(nèi)發(fā)育的孤雌胎兒所得到的成纖維細胞中的單倍體細胞呈現(xiàn)異常核型。豬二倍體孤雌胎兒成纖維細胞可能是研究父系印跡基因的良好的材料。
【關(guān)鍵詞】：豬孤雌胚胎 單倍體細胞 卵裂球 類胚胎干細胞 胎兒成纖維細胞
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R321
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 前言7-9
• 1.材料9-11
• 2.方法11-28
• 3.結(jié)果28-52
• 4.討論52-56
• 5.結(jié)論56-58
• 參考文獻58-66
• 文獻綜述66-73
• 附錄73-74
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章74-75
• 致謝75

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Production of porcine cloned transgenic embryos expressing green fluorescent protein by somatic cell nuclear transfer[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2006年02期

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本文編號：604672