本文關(guān)鍵詞：心肌細胞的培養(yǎng)鑒定及β3-AR蛋白提取方法的比較

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【摘要】：目的優(yōu)化培養(yǎng)乳鼠心肌細胞的技術(shù),篩選出簡便、準確、特異的提取心肌細胞β3-腎上腺素能受體(β3-AR)膜蛋白的方法。方法使用Ⅱ型膠原酶和差速貼壁法收集心肌細胞,分別用總蛋白法、超速離心法、試劑盒法提取心肌細胞β3-AR膜蛋白;BCA法進行蛋白定量;Western blot法檢測蛋白樣品中β3-AR和GAPDH相對含量及提取蛋白的特異性。結(jié)果優(yōu)化心肌細胞的培養(yǎng)方法可以使所得細胞產(chǎn)量大、濃度高,滿足后續(xù)實驗。試劑盒法提取蛋白的濃度(8.26±0.29)g/L總蛋白法提取法的(5.12±0.47)g/L超速離心法的(3.20±0.37)g/L,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。Western blot檢測結(jié)果示,試劑盒提取法所得β3-AR膜蛋白含量(0.22±0.05)超速離心法(0.09±0.03)總蛋白提取法(0.01±0.01),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論優(yōu)化培養(yǎng)心肌細胞的方法可獲得高產(chǎn)量、高純度的細胞。試劑盒提取法可有效提高β3-AR膜蛋白的濃度和特異性。
【作者單位】： 新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科;新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心臟中心;
【關(guān)鍵詞】： 受體 腎上腺素能β 肌細胞 心臟 提取法 細胞培養(yǎng)技術(shù) 心肌細胞 β-AR膜蛋白
【基金】：國家自然科學(xué)基金-地區(qū)科學(xué)基金項目(81260028) 石河子大學(xué)科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計劃“自然科學(xué)與技術(shù)創(chuàng)新”團隊創(chuàng)新項目(2011ZRKXTD-07)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 心肌細胞的原代培養(yǎng)具有保持細胞特有結(jié)構(gòu)和功能的特點,目前已被廣泛應(yīng)用于心血管等疾病的基礎(chǔ)研究領(lǐng)域[1]。由于心肌細胞是終末細胞,不具備分化及增殖能力,如何成功培養(yǎng)高純度、活力好的心肌細胞就成為許多研究的前提。近年來的研究表明β3-腎上腺素能受體(β3-adrenergic re

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本文編號：598430