本文關(guān)鍵詞：心肌細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及β3-AR蛋白提取方法的比較

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【摘要】：目的優(yōu)化培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞的技術(shù),篩選出簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、特異的提取心肌細(xì)胞β3-腎上腺素能受體(β3-AR)膜蛋白的方法。方法使用Ⅱ型膠原酶和差速貼壁法收集心肌細(xì)胞,分別用總蛋白法、超速離心法、試劑盒法提取心肌細(xì)胞β3-AR膜蛋白;BCA法進(jìn)行蛋白定量;Western blot法檢測(cè)蛋白樣品中β3-AR和GAPDH相對(duì)含量及提取蛋白的特異性。結(jié)果優(yōu)化心肌細(xì)胞的培養(yǎng)方法可以使所得細(xì)胞產(chǎn)量大、濃度高,滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)。試劑盒法提取蛋白的濃度(8.26±0.29)g/L總蛋白法提取法的(5.12±0.47)g/L超速離心法的(3.20±0.37)g/L,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western blot檢測(cè)結(jié)果示,試劑盒提取法所得β3-AR膜蛋白含量(0.22±0.05)超速離心法(0.09±0.03)總蛋白提取法(0.01±0.01),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論優(yōu)化培養(yǎng)心肌細(xì)胞的方法可獲得高產(chǎn)量、高純度的細(xì)胞。試劑盒提取法可有效提高β3-AR膜蛋白的濃度和特異性。
【作者單位】： 新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科;新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心臟中心;
【關(guān)鍵詞】： 受體 腎上腺素能β 肌細(xì)胞 心臟 提取法 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 心肌細(xì)胞 β-AR膜蛋白
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金-地區(qū)科學(xué)基金項(xiàng)目(81260028) 石河子大學(xué)科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃“自然科學(xué)與技術(shù)創(chuàng)新”團(tuán)隊(duì)創(chuàng)新項(xiàng)目(2011ZRKXTD-07)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 心肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)具有保持細(xì)胞特有結(jié)構(gòu)和功能的特點(diǎn),目前已被廣泛應(yīng)用于心血管等疾病的基礎(chǔ)研究領(lǐng)域[1]。由于心肌細(xì)胞是終末細(xì)胞,不具備分化及增殖能力,如何成功培養(yǎng)高純度、活力好的心肌細(xì)胞就成為許多研究的前提。近年來(lái)的研究表明β3-腎上腺素能受體(β3-adrenergic re

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本文編號(hào)：598430