本文關(guān)鍵詞：實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠模型及miR-23a慢病毒轉(zhuǎn)染大鼠成骨細(xì)胞的建立

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【摘要】：在各種頜骨、牙周、根尖周慢性炎癥中，病灶區(qū)都會形成病理性的骨吸收，其中尤以牙周炎癥骨吸收最為嚴(yán)重廣泛。牙周病是一種影響牙齒支持組織的感染性疾病，表現(xiàn)出廣泛的臨床、微生物和免疫學(xué)臨床特征，并與多層面的特異性感染因子、宿主免疫反應(yīng)、環(huán)境因素及遺傳易感性等因素的動態(tài)交聯(lián)反應(yīng)相關(guān)。牙周治療的理想目標(biāo)是牙周再生，即“完全的牙周結(jié)構(gòu)與功能性再生”。 MicroRNA分子在1993年由Lee等首先發(fā)現(xiàn)存在于線蟲細(xì)胞內(nèi)，繼而被證實(shí)廣泛存在于動、植物體內(nèi)，是真核細(xì)胞中一類非編碼調(diào)節(jié)性RNA，成熟的microRNAs通過識別并結(jié)合靶向互補(bǔ)mRNA3`非翻譯端，遏阻蛋白翻譯和或調(diào)節(jié)mRNA的穩(wěn)定性，發(fā)揮廣泛的生物學(xué)作用，參與生物體的生長、發(fā)育、免疫防御、衰老、疾病等的過程，被認(rèn)為是先前生理與疾病研究中所缺失的環(huán)節(jié)。Lee等通過基因芯片技術(shù)篩選出了正常與炎癥牙周組織中的差異表達(dá)MicroRNAs；Zhou等發(fā)現(xiàn)miR-18a等可促進(jìn)牙周膜來源干細(xì)胞的骨向分化，而miR-23a參與調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的分化；Liu等人的研究發(fā)現(xiàn)MicroRNAs可持續(xù)調(diào)節(jié)炎癥環(huán)境中牙周膜來源干細(xì)胞的生物學(xué)特性。 現(xiàn)在人們對炎癥骨吸收機(jī)制的認(rèn)識并不完全，其中MicroRNAs是否起了作用？如果MicroRNAs在炎癥環(huán)境中調(diào)控骨改建，那么又是如何發(fā)揮作用的呢？ 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1觀察大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周模型中牙周炎癥環(huán)境中骨吸收的的發(fā)生、發(fā)展及自愈情況，為后期動物體內(nèi)移植提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 2建立下調(diào)和過表達(dá)miR-23a的大鼠成骨細(xì)胞，為后期體內(nèi)移植做準(zhǔn)備。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1采用結(jié)扎上頜右側(cè)第一磨牙的方法，誘導(dǎo)大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的發(fā)生，32只雄性SD大鼠（第四軍醫(yī)大學(xué)動物中心）（200g±50g）隨機(jī)分為4組：結(jié)扎7天組；結(jié)扎28天組；結(jié)扎28天后繼續(xù)喂養(yǎng)7；結(jié)扎28天繼續(xù)喂養(yǎng)28天；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取頜骨-牙體-牙周聯(lián)合樣本，做micro-CT掃描，用于作三維影像重建測量；脫鈣后石蠟包埋切片，用于HE染色、OPG免疫組織化學(xué)染色、TRAP染色，觀察牙周炎癥和骨質(zhì)吸收情況。 2選用新生SD大鼠籽鼠顱骨，II型膠原酶聯(lián)合EDTA消化，改良組織塊法培養(yǎng)成骨細(xì)胞，取傳代第一代及第二代生長期細(xì)胞，經(jīng)由ALP、茜素紅染色鑒定，MTT測其增殖率；慢病毒構(gòu)建工作由上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)服務(wù)公司完成，將獲得的慢病毒載體轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞，通過共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染結(jié)果并照相，并計(jì)算MOI值。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1（1）結(jié)扎7天組牙齦組織內(nèi)炎癥浸潤，牙槽骨表面有破骨細(xì)胞生成，牙槽骨高度和根分叉下骨密度值稍下降，但與正常對照相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；（2）結(jié)扎21天組炎癥范圍擴(kuò)大，牙槽骨表面排列有大量破骨細(xì)胞，牙槽骨高度和骨密度值下降明顯，與正常對照相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；（3）結(jié)扎21天后去結(jié)扎7天組炎癥減輕，但仍有大量破骨細(xì)胞排列于牙槽骨表面，牙槽骨吸收情況緩解，骨密度值稍上升，但與結(jié)扎21天組相比，，差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；（4）結(jié)扎21天后去結(jié)扎21組牙周組織基本恢復(fù)正常，偶見破骨細(xì)胞，牙槽骨高度和骨值密度值明顯增加，與結(jié)扎21天組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 2ALP、茜素紅染色鑒定結(jié)果顯示所培養(yǎng)細(xì)胞具有成骨礦化能力，為成骨細(xì)胞樣細(xì)胞；共聚焦圖片顯示慢病毒轉(zhuǎn)染成功，且可持續(xù)表達(dá)。 結(jié)論 1利用結(jié)扎法可成功誘發(fā)大鼠牙周炎，去除結(jié)扎絲后，牙周炎癥得到控制，牙周組織的再生修復(fù)能力啟動，牙周骨質(zhì)再生。 2成功分離、培養(yǎng)并建立慢病毒轉(zhuǎn)染的大鼠成骨細(xì)胞，miR-23a-up和MiR-23a-down慢病毒體系在轉(zhuǎn)染的成骨細(xì)胞及其傳代后的成骨細(xì)胞中均可持續(xù)表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：實(shí)驗(yàn)性牙周炎 動物模型 骨吸收 miR-23a 成骨細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R781.42;R-332
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 文獻(xiàn)回顧13-23
• 實(shí)驗(yàn)一 大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型的建立23-31
• 1 材料23
• 2 方法23-24
• 3 結(jié)果24-29
• 4 討論29-31
• 實(shí)驗(yàn)二 MIR-23A慢病毒轉(zhuǎn)染大鼠成骨細(xì)胞的建立31-35
• 1 材料31
• 2 方法31-32
• 3 結(jié)果32-34
• 4 討論34-35
• 小結(jié)35-37
• 參考文獻(xiàn)37-44
• 個(gè)人簡歷和研究成果44-45
• 致謝45

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 孫嘉方;荊得寶;劉海江;李fE;王麗琴;王小平;;氯化鑭對大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的治療作用[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2011年06期

2 程玨;李霞;孫克勤;任娟;王翔宇;;不同方法構(gòu)建大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型的研究[J];中國藥物與臨床;2007年09期

本文編號：594748