本文關(guān)鍵詞：酶標儀快速測定大鼠、小鼠精子密度的方法研究

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【摘要】：目的利用酶標儀建立一種快速、準確的測定大、小鼠精子密度的方法。方法 1最適波長確立與回歸方程建立:雄性KM小鼠和SD大鼠各6只,脫頸椎處死后分離左側(cè)附睪,于PBS內(nèi)充分剪碎,水浴充分游離精子,用酶標儀分別在300、380、450、530、600 nm下測定吸光度,擬合吸光度曲線,取相關(guān)系數(shù)最接近于1及標準差最小的為最佳波長;取KM小鼠、SD大鼠各10只,乙醚過量麻醉致死后用PBS稀釋得到4、8、16、36倍的精子懸液,用酶標儀檢測吸光度并使用細胞計數(shù)板對樣品進行計數(shù),以精子密度為橫坐標及吸光度為縱坐標建立回歸方程。2精子吸光度穩(wěn)定性檢測:KM小鼠和SD大鼠各6只,乙醚過量麻醉致死后制備左側(cè)附睪懸液,樣品置于室溫(25℃)或繼續(xù)37℃水浴,并于水浴后的0、20、30、40、50、60 min,取樣品測定吸光度,記錄樣品的吸光度變化。3回歸方程驗證:使用20%乙醇灌胃30 d造KM小鼠少精癥模型,采用吸光度-精子密度曲線方程及細胞計數(shù)板計數(shù)2種方法測定造模KM小鼠精子密度,驗證新方法。結(jié)果確立KM小鼠、SD大鼠吸光度-精子密度曲線在380 nm處可以建立最適回歸方程,KM小鼠精子密度x1與吸光度y1的關(guān)系為線性函數(shù),線性回歸方程為y1=2×10-9x1+0.0648,R2=0.9743;SD大鼠精子密度x2與吸光度y2的關(guān)系為線性函數(shù),線性回歸方程為y2=5×10-9x2+0.0621,R2=0.9940;SD大鼠精子懸液在水浴60 min后,A值與0 min時相比顯著減低(P0.05),但在常溫下40 min后顯著升高(P0.05);KM小鼠精子懸液在水浴和常溫條件下50 min后,與0 min時相比,A值顯著升高(P0.05);與正常對照組相比,用酶標儀檢測和標準曲線計算的乙醇少精組的精子密度均顯著下降(P0.05);與標準曲線計算相比,通過細胞計數(shù)板方法檢測乙醇少精組的精子密度沒有顯著變化。吸光度-精子密度曲線方程法可有效檢測出少精癥動物模型精子密度的減少。結(jié)論利用酶標儀建立吸光度-精子密度曲線方程法可以快速、準確的測定KM小鼠和SD大鼠的精子密度。
【作者單位】： 廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 精子密度 吸光度 SD大鼠 KM小鼠 少精模型
【分類號】：R-33
【正文快照】： 在大鼠、小鼠實驗指標和養(yǎng)殖過程中,測定其精子密度極為普遍。目前常用的測定方法有血球計數(shù)法[1]、流式細胞儀法[2]和分光光度法[3]。其中血球計數(shù)法在處理大量樣品時顯得繁瑣和低效,流式細胞儀法處理繁瑣,費用高;而分光光度法具有操作簡單,費用便宜等優(yōu)點;酶標儀所運用的技

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本文編號：592267