本文關(guān)鍵詞：突變p53對(duì)雌系生殖的影響

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【摘要】：p53基因作為一個(gè)重要的抑癌基因,突變后的功能越來越受到關(guān)注。近年來研究發(fā)現(xiàn)p53基因能影響到雌系生殖,具體機(jī)制是通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控下游的白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor, LIF)促進(jìn)胚胎的植入和子宮組織脫膜化進(jìn)程。p53基因的突變形式大都為點(diǎn)突變,然而在p53基因結(jié)合區(qū)的突變會(huì)導(dǎo)致P53蛋白的構(gòu)象發(fā)生改變,影響p53基因調(diào)控下游基因的轉(zhuǎn)錄激活功能,促進(jìn)腫瘤的發(fā)生,那么p53基因突變后是否具有其他方面的功能呢? p53N236S是p53基因結(jié)合區(qū)的一個(gè)低頻突變,它具有促進(jìn)腫瘤的形成的功能。在研究p53N236S促進(jìn)腫瘤的發(fā)生過程中,發(fā)現(xiàn)p53N236S會(huì)導(dǎo)致雌鼠的生殖能力下降。研究中發(fā)現(xiàn),p53N236S在胚胎植入時(shí)對(duì)其下游基因白血病抑制因子的調(diào)節(jié)能力下降。p53N236S基因型雌鼠的生殖能力下降是因?yàn)榕咛ブ踩胧?還是胚胎致死引起的尚需進(jìn)一步的證實(shí)。LIF是胚胎植入時(shí)重要的蛋白因子,它能促進(jìn)胚胎的植入和蛻膜化的進(jìn)程。 本文分別從p53N236S小鼠的種群水平、個(gè)體水平和細(xì)胞水平三個(gè)方面研究p53N236S對(duì)雌系生殖的影響。研究發(fā)現(xiàn),p53s/+基因型雌鼠的產(chǎn)仔數(shù)為4.46±0.45只顯著低于野生型雌鼠的7.92±0.95只,然而p53s/s基因型雌鼠的產(chǎn)仔數(shù)僅為2.67±0.58只。小鼠的個(gè)體水平,通過免疫組化的方法對(duì)d4天雌鼠子宮組織進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)野生型p53的雌鼠的p53蛋白表達(dá)水平最低,LIF的表達(dá)水平最高；而p53s/s基因型雌鼠的p53蛋白表達(dá)水平最高,LIF的表達(dá)水平最低。這表明胚胎植入時(shí)會(huì)促進(jìn)p53的表達(dá),進(jìn)而上調(diào)LIF的水平促進(jìn)胚胎植入,一旦LIF的表達(dá)水平不足,可能會(huì)反饋P53蛋白上調(diào)。研究中還發(fā)現(xiàn)ER α在三種基因型的雌鼠中表達(dá)水平無明顯差異,表明p53N236S突變不會(huì)影響ER α的表達(dá)。細(xì)胞水平上,將p53與LIF基因的結(jié)合區(qū)DNA構(gòu)建到GFP報(bào)告載體中,轉(zhuǎn)染p53+p53s/+和p53s/s三種細(xì)胞,通過熒光光強(qiáng)來評(píng)測(cè)三種基因?qū)IF的調(diào)控能力,對(duì)比發(fā)現(xiàn)p53+/+對(duì)LIF的調(diào)控能力最強(qiáng),p53s/s最弱。 由此在細(xì)胞水平、動(dòng)物個(gè)體水平和小鼠種群三個(gè)方面可知,雌鼠中p53N236S位點(diǎn)突變會(huì)導(dǎo)致“窗口期”LIF的表達(dá)水平降低,進(jìn)而可能導(dǎo)致胚胎植入失敗影響雌鼠的生殖能力,而p53N236S位點(diǎn)突變?cè)谛凼笾袑?duì)生殖的顯著影響還尚不可知。
【關(guān)鍵詞】：p53 LIF 胚胎植入 p53通路 SNP
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第一章 研究背景12-24
• 1.1 P53通路及其家族蛋白對(duì)生殖的影響12-19
• 1.1.1 p53基因在腫瘤和生殖方面的作用12-15
• 1.1.2 p53通路對(duì)生殖的影響15-17
• 1.1.3 p53家族蛋白對(duì)生殖的影響17-19
• 1.2 LIF在胚胎植入時(shí)的功能19-22
• 1.2.1 LIF在哺乳動(dòng)物胚胎植入時(shí)的作用19-20
• 1.2.2 LIF通過Jak-SATAs通路調(diào)控胚胎植入相關(guān)因子20-21
• 1.2.3 雌二醇對(duì)LIF的調(diào)節(jié)功能21-22
• 1.3 P53N236S的背景介紹22-23
• 1.4 研究意義23-24
• 第二章 p53N236S基因型小鼠的生殖24-33
• 2.1 材料和試劑24-26
• 2.1.1 材料24-25
• 2.1.2 試劑25-26
• 2.1.3 主要儀器及軟件26
• 2.2 方法26-28
• 2.2.1 小鼠DNA提取26-27
• 2.2.2 小鼠基因型鑒定27
• 2.2.3 小鼠繁育組的設(shè)置27-28
• 2.3 結(jié)果28-31
• 2.4 討論31-33
• 第三章 P53N236S在胚胎植入期對(duì)LIF的影響33-45
• 3.1 材料與方法33-34
• 3.1.1 材料33
• 3.1.2 儀器33-34
• 3.1.3 軟件34
• 3.2 方法34-41
• 3.2.1 Plug的觀察34
• 3.2.2 石蠟切片34-36
• 3.2.3 HE染色36-37
• 3.2.4 免疫組化(IHC)37-38
• 3.2.5 總RNA的提取及cDNA制備38-40
• 3.2.6 RT-PCR40-41
• 3.3 結(jié)果41-43
• 3.3.1 植入期p53、 ER α和LIF的表達(dá)水平41-42
• 3.3.2 p53、ERa和LIF-mRNA表達(dá)水平42-43
• 3.4 討論43-45
• 第四章 細(xì)胞水平上P53N236S對(duì)LIF表達(dá)水平的影響45-60
• 4.1 儀器與試劑45-47
• 4.1.1 儀器45-46
• 4.1.2 試劑46-47
• 4.2 方法47-58
• 4.2.1 GFP報(bào)告基因載體的構(gòu)建47-54
• 4.2.2 小鼠MEF細(xì)胞的制備54-55
• 4.2.3 MEF細(xì)胞的培養(yǎng)、凍存及復(fù)蘇55-57
• 4.2.4 轉(zhuǎn)染57-58
• 4.3 結(jié)論58-59
• 4.4 討論59-60
• 第五章 總結(jié)與展望60-62
• 致謝62-63
• 參考文獻(xiàn)63-71
• 附錄71

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：590151