本文關(guān)鍵詞：用于多模態(tài)分子影像含雙報告基因的腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建含有由人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體基因（TFRC）和螢火蟲熒光素酶基因（Luc）組成的雙報告基因的重組腺病毒載體（Ad），為磁共振（MR）和生物發(fā)光雙模態(tài)分子成像提供一個全新的實(shí)驗(yàn)工具。 方法從psiCHECK-2質(zhì)粒中用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增Luc基因，克隆入腺病毒穿梭載體pShuttle-CMV后行Nhe Ⅰ/Xba Ⅰ雙酶切和測序鑒定。然后利用PCR擴(kuò)增TFRC基因，克隆到pShuttle-CMV-CMV-Luc穿梭載體的多克隆位點(diǎn)區(qū)，進(jìn)行Sfi Ⅰ酶切和測序鑒定，得到的重組穿梭載體pShuttle-TFRC-Luc再與腺病毒骨架載體（pAdeno）同源重組，然后將Xho Ⅰ酶切鑒定正確的重組病毒質(zhì)粒經(jīng)293細(xì)胞包裝純化并行PCR鑒定，測定其病毒滴度。用獲得的重組腺病毒Ad-TFRC-Luc感染人結(jié)直腸癌LOVO細(xì)胞，轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TfR)和熒光素酶蛋白的表達(dá)分別用免疫蛋白印跡（western blot）、實(shí)時熒光定量PCR法和體外生物發(fā)光成像來檢測。 結(jié)果轉(zhuǎn)鐵蛋白受體基因正確重組到攜帶有熒光素酶基因的腺病毒載體中，測序結(jié)果與GenBank序列完全一致，酶切鑒定結(jié)果顯示均能得到與理論大小相符的2.3kb片段。Ad-TFRC-Luc重組腺病毒構(gòu)建成功，，病毒滴度達(dá)1.6×10~(10)pfu/ml，感染LOVO細(xì)胞48小時后轉(zhuǎn)鐵蛋白受體和熒光素酶蛋白的表達(dá)水平顯著增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。 結(jié)論Ad-TFRC-Luc重組腺病毒構(gòu)建成功，可用于下一步的多模態(tài)活體成像示蹤腫瘤生長、基因治療以及移植干細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：腺病毒 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體 熒光素酶 報告基因 分子影像
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R735.3;R3416
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-29
• 結(jié)果29-34
• 討論34-36
• 結(jié)論36-37
• 附圖37-49
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 文獻(xiàn)綜述52-57
• 綜述參考文獻(xiàn)55-57
• 致謝57-58
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)成果58-59
• 個人簡歷59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 廖繼春;郜發(fā)寶;;磁共振腫瘤分子成像研究進(jìn)展[J];國際醫(yī)學(xué)放射學(xué)雜志;2010年04期

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本文編號：584469