本文關(guān)鍵詞：構(gòu)建人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶修飾的永生化大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞株

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【摘要】：背景:骨髓間充質(zhì)干細胞具有取材方便、多向分化及低免疫原性等優(yōu)點,是轉(zhuǎn)基因細胞移植鎮(zhèn)痛領(lǐng)域中的理想載體細胞,但由于骨髓中間充質(zhì)干細胞含量有限、體外培養(yǎng)的復(fù)制性衰老等問題,制約其在鎮(zhèn)痛研究中的應(yīng)用。目的:構(gòu)建永生化大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞株,為轉(zhuǎn)基因細胞移植鎮(zhèn)痛提供載體細胞來源。方法:構(gòu)建攜帶人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶基因的慢病毒pL V-Puro-EF1α-h TERT并轉(zhuǎn)染第3代骨髓間充質(zhì)干細胞后進行嘌呤霉素篩選,獲得陽性細胞克隆并擴大培養(yǎng),分別采用RT-PCR和TRAP法檢測轉(zhuǎn)染細胞人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶的表達和端粒酶活性,同時觀察細胞形態(tài)、增殖和誘導(dǎo)分化能力、表面分子以及Nestin、MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ的表達,檢測細胞染色體核型和致瘤性。結(jié)果與結(jié)論:人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細胞可以體外連續(xù)培養(yǎng)超過30代。與未轉(zhuǎn)染的細胞和對照病毒轉(zhuǎn)染的細胞相比,慢病毒轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細胞人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶mR NA表達、端粒酶活性以及細胞增殖能力均提高,細胞周期主要處于G2/M以及S期,增殖指數(shù)明顯升高;細胞表面分子CD29、CD44、CD90表達陽性率大于70%,而CD34、CD45表達陽性率不足5%,胞漿Nestin的表達陽性,而MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ未見表達,保留了干細胞成骨、成脂、成神經(jīng)的分化能力,細胞形態(tài)、染色體核型均正常,裸鼠接種無致瘤性。以上結(jié)果提示成功構(gòu)建了人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶基因修飾的永生化大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞株,為轉(zhuǎn)基因細胞移植用于鎮(zhèn)痛研究提供了生物學(xué)性狀均一、穩(wěn)定的安全載體細胞。
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院麻醉科;
【關(guān)鍵詞】： 骨髓 間質(zhì)干細胞 端粒 末端轉(zhuǎn)移酶 RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶 干細胞 骨髓干細胞 人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶 骨髓間充質(zhì)干細胞 永生化 鎮(zhèn)痛 國家自然科學(xué)基金
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(81171468) 教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點專項科研基金(200805581112)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 文章亮點:骨髓間充質(zhì)干細胞存在含量有限以及復(fù)制衰老等問題,制約其在鎮(zhèn)痛研究中的應(yīng)用。實驗成功構(gòu)建了人端粒酶反轉(zhuǎn)錄基因修飾的永生化大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞株,并證實該細胞株的端粒酶活性以及增殖能力有明顯提高,同時保留了干細胞特性和轉(zhuǎn)化特性,為將來轉(zhuǎn)基因細胞移植鎮(zhèn)痛

【共引文獻】

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【相似文獻】

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號：584237